[发明专利]一种用于化学发光共振能量转移的集成化双酶‑量子点制备方法

摘要

本发明涉及一种用于化学发光共振能量转移的集成化双酶‑量子点制备方法。这种集成化的纳米材料由荧光量子点、过氧化物酶、氧化酶组成，以荧光量子点为核心，先后以共价键将过氧化物酶和氧化酶连接于量子点上。该集成化的双酶‑量子点纳米材料具有良好的稳定性和水溶性，发射波长可调。将该材料用于化学发光共振能量转移时，具有高的转移效率（接近50%），显著高于游离的双酶‑量子点化学发光共振能量转移体系。该集成化的双酶‑量子点可用于特异性地检测氧化酶对应的底物分子、多元分析，细胞或组织成像等。

主权项

一种用于化学发光共振能量转移的集成化双酶‑量子点的制备方法，其特征在于包括以下三个步骤：（1）将碲粉、硼氢化钠（NaHB4）和超纯水于离心管中反应，碲粉全部溶于溶液反应完毕，制备得到碲氢化钠溶液，取出置于低温保存；（2）将10 mmol/L CdCl2溶液和N‑乙酰‑L‑半胱氨酸（NAC）于三口烧瓶中混合，在N2氛围下，搅拌反应30 min后，调节pH至8.0；移取（1）中的储存液于三口烧瓶中，搅拌反应10 min，Cd2+、Te2‑、NAC三者的摩尔比为4:1:7；控制反应温度为150℃，反应时间为0.5‑2 h，得到发射波长为500‑650 nm的碲化镉量子点水溶液；（3）将1‑乙基‑（3‑二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（EDC）、N‑羟基琥珀酰亚胺（NHS）和量子点于0.01 M 的pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中混合均匀，量子点、EDC和NHS的摩尔比为15:1:0.8,活化量子点30 min；称取6 mg辣根过氧化物酶(HRP)、9 mg葡萄糖氧化酶(GOD)、6mg胆固醇氧化酶（ChOx），分别用1 mL pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液溶解；再将溶解后的HRP溶液加入到活化后的量子点溶液中继续振荡30 min，然后加入溶解后的GOD或者ChOx溶液继续振荡2.5 h；反应后的溶液转移到超滤管中，以10000 r/min的转速离心10 min，将离心管中的上层混合物用1 mL 磷酸盐缓冲溶液溶解转移到1 mL离心管中低温保存，制备得到双酶‑量子点纳米材料。