[发明专利]检测多巴胺的荧光适体传感器及方法

摘要

本发明公开了一种荧光适体传感器检测多巴胺的方法，它的步骤如下：（1）构建荧光适体传感器：首先利用tris‑HCl缓冲液离心溶解粉末状荧光适体，然后用tris‑HCl缓冲液配制出含10nM荧光适体，10μg/ml氧化石墨烯的淬灭溶液；（2）荧光强度的检测：把不同浓度的多巴胺加入到淬灭溶液中，然后在室温条件下孵育25分钟，设定荧光分光光度计激发发射波长及入射发射狭缝，取孵育好的反应溶液加入石英比色皿中检测，得出多巴胺的发射谱线。本发明利用氧化石墨烯作为荧光淬灭剂，利用π‑π堆积作用使在5’端修饰有FAM荧光基团的适体结合在氧化石墨烯表面，通过能量转移FAM荧光能量传导到氧化石墨烯中，从而FAM荧光信号消失。

主权项

1.一种检测多巴胺的荧光适体传感器，其特征在于：（1）FAM 标记适体荧光淬灭：首先利用tris‑Hcl 缓冲液离心溶解粉末状荧光适体，然后用tris‑Hcl 缓冲液配制出含10nM 荧光适体，氧化石墨烯的淬灭溶液；（2）荧光强度的检测：把不同浓度的多巴胺加入到淬灭溶液中，在室温条件下孵育，设定荧光分光光度计激发发射波长及入射发射狭缝，取孵育好的反应溶液加入石英比色皿中检测，得出不同浓度的多巴胺的荧光强度；根据不同浓度的多巴胺的荧光强度，拟合出公式y=36.66+0.1474x，其中y 为多巴胺的荧光强度，x 为多巴胺的的浓度；所述步骤（1）中缓冲液pH 7.4、缓冲液组成为50mM tris‑Hcl 和30mM Nacl，荧光适体结构为5’‑FAM‑GTCTCTGTGTGCGCCAGAGAACACTGGGGCAGATATGGGCCAGCACAGAATGAGGCCC，由生物公司合成并分装，使用前加入缓冲液离心溶解，离心速度为3000rpm，时间5min。