[发明专利]由海洋微生物菌株Y112制备α-环糊精葡萄糖基转移酶的方法

摘要

本发明涉及一种由海洋微生物菌株Y112制备α‑环糊精葡萄糖基转移酶的方法,包括海洋微生物菌株Y112粗酶液的制备、乙醇分级沉淀、凝胶层析和DEAE‑Sepharose离子交换层析,制备α‑环糊精葡萄糖基转移酶产品单一纯度高,纯度提高了12.4倍，回收率为57.5％。将在医药、食品、化工、化妆品、工业和农业以及分析化学等方面得到广泛的应用。

主权项

1.一种由海洋微生物菌株Y112制备α-环糊精葡萄糖基转移酶的方法,包括下列步骤:1)、海洋微生物菌株Y112粗酶液的制备在装种子培养基液30mL的三角瓶中接种海洋微生物菌株Y112后，30℃、200r/min下活化22h，以4％(V/V)的接种量接种至装有25mL发酵培养基的三角瓶中，27℃、230r/min培养50h，收集发酵液在10000g的离心力条件下离心15min，上清为粗酶液；所述种子培养基的组成：每升培养基含可溶性淀粉10g，蛋白胨5g，酵母浸粉5g，K2HPO4 1g，MgSO4·7H2O 0.15g，NaCl 50g，121℃灭菌20min,所述发酵培养基的组成：每升培养基含玉米淀粉10g，蛋白胨5g，酵母浸粉5g，K2HPO4 1g，MgSO4·7H2O 0.15g，NaCl 50g，121℃灭菌20min；所述海洋微生物菌株Y112于2015年7月13日保藏于中国武汉中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO：M2015447；2)、乙醇分级沉淀一级沉淀：向步骤1的粗酶液中徐徐加入无水乙醇，使乙醇的最终体积分数为20％—40％,静置，离心取上清液；二级沉淀：向一级沉淀得上清液中继续加入无水乙醇，使乙醇的最终体积分数为40％-55％，静置，离心，待沉淀风干后用磷酸缓冲液溶解成溶液；3)、凝胶层析先用pH7.2磷酸钠缓冲液平衡Superdex 200分子筛层析柱，将步骤2得到的酶液上样，然后用相同缓冲液进行洗脱，流速为2mL/min，得到若干洗脱峰，其中只有主峰有活性，对其进行收集浓缩；4)、DEAE-Sepharose离子交换层析先用pH 7.2磷酸钠缓冲液平衡DEAE-Sepharose离子交换层析柱，将步骤3得到的酶液上样，然后用含0-1mol/L的相同缓冲液进行线性梯度洗脱，流速为2mL/min，得到三个洗脱峰，其中仅第二洗脱峰进行收集浓缩,制得产品单一纯度高的α-环糊精葡萄糖基转移酶。