[发明专利]一种小麦种子纯度鉴定方法

摘要

本发明公开了一种小麦纯度的鉴定方法，为对现有技术的改进。本发明(1)样品提取液由无毒无害的乙醇替代剧毒的α‑氯乙醇，有效的降低了对人体的毒害及环境的污染；（2）通过对丙稀酰胺浓度和交联度进行了适当调整，不仅可以使胶片坚韧有弹性而且也能更好的发挥分子筛的作用；（3）改进后可一次性灌制好凝胶，节省了步骤。本发明具有工艺流程简洁、操作简单、耗时短、环保等特点。同时，由于增加了胶片的清洗和保存创新技术，经过清洗后的胶片背景清晰，置于保存液湿润后用保鲜膜密封，可长期保存，便于后续的鉴定及研究。

主权项

一种小麦种子纯度鉴定方法，其特征在于，该方法步骤如下： 1）溶液配制样品提取液称取甲基绿0.05g，溶于100 mL 70%(wt)乙醇中，4℃保存；凝胶溶液称取丙烯酸胺150.0g，N，N’一亚甲基双丙烯酰胺15.0g，尿素60.0g，抗坏血酸1.0g，甘氨酸1.0g，硫酸亚铁0.05g，加水溶解后，加入20 mL冰乙酸，定容至1000mL，在4℃条件下保存；0.6%(wt)过氧化氢溶液取30%(wt)的过氧化氢2mL，加水定容至100 mL，在4℃条件下保存；染色液称取考马斯亮蓝（R250）0.25g，加25mL无水乙醇溶解，加入50g三氯乙酸，加水至500 mL，混匀；凝胶胶片清洗液称取碳酸钠6.0g，十二烷基苯磺酸2.0g，羧甲基纤维素（CMC）0.6g，三聚磷酸钠1.0g，40 %(wt)的硅酸钠溶液0.4g，用水溶解，定容至500mL备用；2）样品提取取一整粒粉碎后的小麦种子，放入1.5mL离心管中，用移液管加入样品提取液200μL，在30℃恒温箱中静置提取30分钟，取上清液；3）凝胶制备将预先洗净晾干的玻璃板装入胶框中，插好梳子，平放在桌面上，取凝胶溶液于烧杯中，用微量进样器按凝胶溶液∶0.6%(wt)过氧化氢溶液为500:1（v/v）的比例加0.6%(wt)过氧化氢溶液，迅速摇匀，沿长玻璃板边缘底部倒入，静置；4）点样凝胶聚合后，拔出样品梳并将样品槽清理干净，用微量进样器在样品槽中加入的步骤2）中获得的样品上清液15μL，每点一粒后，都要用去离子水清洗进样器3次； 5）电泳加样完毕后，倒入电极缓冲液，上槽电极缓冲液面要高于短玻璃板，下槽电极缓冲液面要高于铂金丝，将电源线正极接中槽，负极接两侧槽，接通电源，采用350V稳压进行电泳，1小时后，关闭电源；6）卸板倒出电极液，从电泳槽内取出胶室，卸下胶条，启开玻璃板，取出胶片，浸入染色液中；7）凝胶染色与清洗凝胶胶片在35℃恒温条件下胶片置于染色液中染色60分钟，将胶片取出置于凝胶胶片清洗液中，并振荡3分钟，清洗完毕。