[发明专利]一种同时检测三种引起马铃薯块茎坏死的病毒的三重RT-PCR方法及其引物组合在审
| 申请号： | 201510439761.1 | 申请日： | 2015-07-24 |
| 公开（公告）号： | CN105039594A | 公开（公告）日： | 2015-11-11 |
| 发明（设计）人： | 胡新喜;雷艳;熊兴耀;周华兰 | 申请（专利权）人： | 湖南农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京知本村知识产权代理事务所 11039 | 代理人： | 刘江良 |
| 地址： | 410128 *** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种同时检测三种引起马铃薯块茎坏死的病毒的三重RT-PCR方法及其引物组合。具体采用3对引物，一次RT-PCR同时检测危害马铃薯块茎的马铃薯Y病毒块茎坏死株系(PVYNTN)、番茄斑萎病毒(TSWV)、马铃薯帚顶病毒(PMTV)三种病毒。由于TSWV、PVYNTN、PMTV三种病毒都能引起马铃薯块茎发生坏死，症状难以区分，运用传统的单重RT-PCR需要通过3次反应才能完成检测，比较费时费力。因此，本发明通过一个多重RT-PCR反应即可完成这3种病毒的检测，检测效率极大提高，检测的成本极大降低。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 同时 检测 引起 马铃薯 块茎 坏死 病毒 三重 rt pcr 方法 及其 引物 组合 | ||
【主权项】：
一种同时检测三种引起马铃薯块茎坏死的病毒的三重RT‑PCR方法，其特征在于，其步骤包括：1）取马铃薯植株叶片或块茎，提取其RNA；2）以步骤1）得到的RNA为模板，通过反转录，得到cDNA；3）以步骤2）得到的cDNA为模板，用3对引物对其进行PCR扩增；4）PCR产物凝胶电泳，根据目的片段大小及阳性对照，判断病毒感染情况；其中，所述引物如下：检测番茄斑萎病毒(TSWV)的引物为：正向引物如SEQ ID NO.１所示；反向引物如SEQ ID NO.２所示；检测马铃薯Y病毒块茎坏死株系(PVYNTN)的引物为：正向引物如SEQ ID NO.３所示；反向引物如SEQ ID NO.４所示；检测马铃薯帚顶病毒(PMTV)的引物为：正向引物如SEQ ID NO.５所示；反向引物如SEQ ID NO.６所示。
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