[发明专利]一种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的方法及应用

摘要

本发明公开了一种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的方法，包括以下步骤：步骤一、培养基配制及消毒灭菌；步骤二、接种培养；步骤三、菌体同步化处理；步骤四、物理浓缩处理。经该方法处理得到的沼泽红假单胞菌可达7.3×1012个/g，菌体形态均匀，生长处于同一时期，高效复活；本发明同时公开了一种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的应用，通过上述方法制得的高浓度沼泽红假单胞菌适口性好，在养殖前期可作为生物饵料，提供蛋白和B族维生素；在养殖中后期，可用于调控水质，定期泼洒沼泽红假单胞菌有利于在养殖中下层水体形成优势菌相，有效抑制致病菌。

主权项

1.一种沼泽红假单胞菌同步化浓缩的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、沼泽红假单胞菌培养三角瓶培养，称取乙酸钠8g/l，氯化铵2g/l，酵母膏3g/l，盐卤5ml/l，氯化钙0.5g/l，黄腐酸钾0.8g/l，磷酸氢二钾1g/l，以上试剂溶解后用浓度为3％双氧水消毒30分钟；灭菌完毕加入碳酸氢钠2g/l溶解,装入1L三角瓶中；或者，大规模培养，称取乙酸钠8kg/t，氯化铵2kg/t，酵母膏3kg/t，盐卤5L/t，氯化钙0.5kg/t，黄腐酸钾0.8kg/t，磷酸氢二钾1kg/t，以上试剂溶解后用浓度为3％双氧水消毒30分钟；灭菌完毕加入碳酸氢钠2kg/t溶解，加入到塑料袋中；步骤二、接种培养按20％接种量接种沼泽红假单胞菌菌液，32℃，3000‑5300lx白炽灯光照条件下培养72h‑96h，将培养液稀释100倍，在660nm处测定OD值达到1.8以上；接种所使用的器具均灭菌处理，接种过程无菌操作；步骤三、菌体同步化处理将培养液置于黑暗条件下，不接触自然光，按红光:蓝光比例为4：1～1：1进行搭配照射，照射3～5h；目的是使沼泽红假单胞菌代谢活动逐步减慢，形态逐渐趋于一致；步骤四、物理浓缩处理向上述同步化处理后的培养液中加入聚丙烯酰胺阳离子、羧甲基纤维素钠、瓜尔豆胶、黄原胶、壳聚糖的一种或几种，比例为0.5％～1.5％，避光处保存3.5‑5小时，去掉上清液，即可得超浓缩沼泽红假单胞菌，细胞数目达7.3×1012个/g。