[发明专利]一种水牛卵母细胞去核的方法

摘要

本发明提供了一种水牛卵母细胞去核方法，包括以下步骤：1)从屠宰场卵巢获取卵丘卵母细胞复合体，38.5℃、5％CO₂、饱和湿度的条件下体外成熟培养22-24h；2)用100μL枪头轻缓吹打成熟培养后的COCs，去除卵丘细胞，剩下卵母细胞；3)挑选含第一极体的MⅡ期卵母细胞，用于去核；4)将水牛卵母细胞转入含有7.5μg/mL细胞松弛素B(CB)的培养液中,38.5℃、5％CO₂、饱和湿度的条件下培养30min；5)将处理后的水牛卵母细胞转入覆盖石蜡油的30-40μL去核操作液内；6)在配有纺锤体成像系统的倒置显微镜下去核。采用细胞松弛素B培养卵母细胞，使用纺锤体成像系统观测辅助去核，能够有效提高去核效率。

主权项

一种用于水牛卵母细胞去核的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：1)从屠宰场卵巢获取卵丘卵母细胞复合体(COCs)，38.5℃、5％CO₂、饱和湿度的条件下体外成熟培养22‑24h；2)用100μL枪头轻缓吹打成熟培养后的COCs，去除卵丘细胞，剩下卵母细胞；3)挑选含第一极体的MⅡ期卵母细胞，用于去核；4)将水牛卵母细胞转入含有7.5μg/mL细胞松弛素B(CB)的培养液中,38.5℃、5％CO₂、饱和湿度的条件下培养30min；5)将处理后的水牛卵母细胞转入覆盖石蜡油的30‑40μL去核操作液内；6)在配有纺锤体成像系统的倒置显微镜下，用固定管固定水牛卵母细胞，注射针翻转卵母细胞，找到卵母细胞膜边缘的小突起，并在纺锤体成像系统，确定可见小突起区域较其它部位明亮，且不断闪烁，即表明其为纺锤体；吸取纺锤体、极体和周围少量胞质，在去核管中，清晰可见闪亮的纺锤体，确定去核。