[发明专利]一种基于尿中本胆烷醇酮检测新型睾酮兴奋剂的方法

摘要

本发明涉及一种基于尿中本胆烷醇酮检测新型睾酮兴奋剂的方法，包括取尿样，在恒温水浴中酶解，本胆烷醇酮葡萄糖醛酸甙经酶解后生成本胆烷醇酮，提取本胆烷醇酮，测定其碳元素同位素比，得δ1值，将提取到的本胆烷醇酮经化学方法处理后，得到A‑nor‑5β‑androstane‑2,17‑dione，测定A‑nor‑5β‑androstane‑2,17‑dione的碳元素同位素比，得δ2值，考察两个化合物的碳元素同位素比值，如果δ1‑δ2的差值大于2.8‰，则表明尿样来源于服用新型睾酮兴奋剂的尿样。本方法用于体育领域新型睾酮兴奋剂的检测，检测灵敏，准确性高。

主权项

一种基于尿中本胆烷醇酮检测新型睾酮兴奋剂的方法，其特征在于，包括：取尿样6mL，加入1mL pH＝7.0的磷酸盐缓冲液和50μLβ‑葡萄糖醛酸甙酶溶液，混匀，在55℃恒温水浴中酶解3小时，取出，加入8mL叔丁基甲醚振荡萃取，离心，吸取上层有机溶液，在65℃加热的情况下用氮气吹干，再用50μL 100％乙腈溶剂溶解，转入样品瓶中，封盖，以HPLC纯化，收集24‑25分钟含有本胆烷醇酮的流出液1mL，取50μL的流出液，在60℃加热的情况下用氮气吹干，采用同位素比质谱仪分析其碳元素同位素比，得本胆烷醇酮的δ1值，余下的流出液在60℃加热的情况下用氮气吹干，得本胆烷醇酮，其中，所述HPLC纯化的步骤为：进样量为45μL，色谱柱为ZORBAX SB‑C18，规格为4.6mm×250mm×5μm，流动相为乙腈‑水系统，洗脱起始流动相体积比为：30％乙腈‑70％水，等梯度洗脱，于40分钟内完成至流动相为100％乙腈，流速为1mL/min；取上述制备的本胆烷醇酮，加入4μL冰醋酸及16μL氧化剂，在68℃保持1小时，再升温至90℃保持1小时，得反应液，反应液用50μL CH2Cl2提取两次,合并提取液，提取液用氮气吹干后，加入20mg无水碳酸钠及10μL醋酐，在120℃保持2.5小时后，用氮气吹干，再加入超纯水分散残渣，用50μL CH2Cl2提取，有机层在60℃加热的情况下用氮气吹干，得到A‑nor‑5β‑androstane‑2,17‑dione，采用同位素比质谱仪分析其碳元素同位素比，得A‑nor‑5β‑androstane‑2,17‑dione的δ2值，其中，所述氧化剂由13.5g的铬酐、500mL的H2O和40mL质量浓度70％的H2SO4组成；考察本胆烷醇酮的δ1值与A‑nor‑5β‑androstane‑2,17‑dione的δ2值，如δ1‑δ2的差值大于2.8‰，则表明尿样为使用新型睾酮兴奋剂的尿样。