[发明专利]一种提取革兰氏阳性菌基因组的试剂盒

摘要

本发明提供一种提取革兰氏阳性菌基因组的试剂盒，属于生物技术领域。本发明所述的试剂盒，包括革兰氏阳性菌细胞的破碎，DNA的游离与杂蛋白的抽除，DNA吸附柱吸附DNA以及杂质的去除，DNA洗脱的具体步骤。常规的革兰氏阳性菌基因组的试剂盒提取步骤较为繁琐，耗时较长，提取时间一般需要12h左右，一种提取革兰氏阳性菌基因组的试剂盒与常规的革兰氏阳性菌基因组DNA提取方法相比仅需要2h左右即可提取到革兰氏阳性菌基因组DNA，不仅节省了大量提取时间，同时简化了实验步骤，能够更有效、快速、经济地提取到革兰氏阳性菌基因组DNA。

主权项

一种提取革兰氏阳性菌基因组的试剂盒，包括革兰氏阳性菌细胞的破碎，DNA的游离与杂蛋白的抽除，DNA吸附柱吸附DNA以及杂质的去除，DNA洗脱，其特征是：革兰氏阳性菌细胞的破碎：取3ml革兰氏阳性菌过夜培养液分3次加到1.5ml离心管中，每次10000‑13000rpm/min 离心1‑5min后弃上清；往菌体沉淀中加入0.2‑0.5ml ddH₂O悬浮沉淀，并加入50‑80μl Buffer A溶液，40℃保温10‑50min；加入30‑60μl Buffer B，5‑10μl Buffer C混匀，37℃保温30‑60min；加入0.4‑0.6ml Buffer D混匀；DNA的游离与杂蛋白的抽除：加入200‑600μl Buffer E抽提，10000‑13000rpm/min 离心10‑30min，将上清转移至干净的1.5ml离心管中；加入200‑600μl Buffer F抽提，10000‑13000rpm/min 离心10‑30min，将上清转移至干净的1.5ml离心管中；DNA吸附柱吸附DNA以及杂质的去除：往离心管中加入与上清等体积的沉淀剂，混匀后加入DNA吸附柱，10000‑13000rpm/min 离心1‑5min，弃废液，加入200‑600μl去蛋白液，10000‑13000rpm/min 离心1‑5min，弃废液，加入200‑600μl漂洗液，10000‑13000rpm/min 离心1‑5min，弃废液，加入200‑600μl漂洗液，10000‑13000rpm/min 离心1‑5min，弃废液，10000‑13000rpm/min 离心1‑5min，静置吹干；DNA洗脱：往吸附柱中加入10‑50μl洗脱液，10000‑13000rpm/min 离心1‑5min，所得液体为革兰氏阳性菌基因组DNA；取2‑7μl DNA水溶液，于1%琼脂糖凝胶中电泳检测。