[发明专利]大叶钩藤的快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种大叶钩藤的快速繁殖方法，包括以下步骤步骤一、制作大叶钩藤的无菌外植体；步骤二、将所述无菌外植体转入第一培养基中进行光照培养；步骤三、将步骤二培养的带有腋芽的无菌外植体转入第二培养基中进行光照培养，培养直至生根；步骤四、将生根的大叶钩藤苗移栽至基质中培养。本发明通过建立大叶钩藤的快速繁殖方法，具有繁殖率高、繁殖速率快等优点，便于在生产上大面积推广种植，满足了中药资源开发的迫切需要。

主权项

一种大叶钩藤的快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、制作大叶钩藤的无菌外植体，选取大叶钩藤靠近顶芽的带节嫩茎段，摘除多余叶片，用细毛刷在流水下轻轻刷洗外植体表面，然后剪成2‑4cm长的带腋芽的嫩茎段作为大叶钩藤的无菌外植体；步骤二、将所述无菌外植体转入第一培养基中进行光照培养，控制温度为24℃～26℃，诱导腋芽形成；所述第一培养基由B5培养基、1～1.3mg/L的竹醋液、35g/L的罗汉果渣和4g/L的琼脂组成；大叶钩藤的无菌外植体在第一培养基中培养时，调节pH为5.7，控制光照强度为1600lx，每天的光照时间为8小时；步骤三、将步骤二培养的带有腋芽的无菌外植体转入第二培养基中进行光照培养，控制温度为24℃～26℃，培养直至生根；其中，所述第二培养基包括固态培养基和液态培养基，所述第二培养基放置于培养盒中，使固态培养基在所述液态培养基的上方；从无菌外植体的下端开始，将带有腋芽的无菌外植体的1/8浸没于所述液态培养基，将带有腋芽的无菌外植体的3/8置于所述固态培养基中；大叶钩藤的无菌外植体在第二培养基中培养时，调节所述固态培养基的pH为5.7，调节所述液态培养基的pH为5.3，控制光照强度为2000lx，每天的光照时间为11小时；所述固态培养基由white培养基、0.1～0.2mg/L的香蕉泥、0.1～0.5mg/L的激动素KT、0.7～0.8mg/L的吲哚丁酸、4g/L的琼脂和0.1～0.5g/L的活性炭组成；所述液态培养基由B5培养基、0.6～0.9mg/L竹醋液和0.2～0.4mg/L椰子提取液组成；所述椰子提取液的制作方法为将椰衣纤维粉碎至150‑200目，向所述椰衣纤维中加入其5倍质量的淘米水，控制温度为70℃，温浸1小时；过滤，得第一滤液和第一滤渣，向所述第一滤渣中加入其3倍质量的淘米水，控制温度为80℃，温浸1.5小时，过滤，得第二滤液，将所述第一滤液和第二滤液合并，并浓缩至1.52mg/L，即得所述椰子提取液；步骤四、将生根的大叶钩藤苗移栽至基质中培养，移栽后在所述基质表面铺设一层聚乙烯缓释膜，所述聚乙烯缓释膜中注入有质量配比为10:1:10:2的硫酸亚铁、有机螯合肽、硼砂和七水硫酸锌；所述基质从下到上由草灰层、细胞分裂剂层、鱼骨层和膨润土层按厚度比为4:1:2:5构成。