[发明专利]一种人脐带间充质干细胞规模化制备的方法

摘要

本发明公开了一种人脐带间充质干细胞规模化制备的方法。本发明包括以下步骤：收集脐带及胎盘；取脐带分离提取hUC‑MSC，前期使用传统含胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）的DMEM/F12培养液进行扩增培养；后期以脐带同来源胎盘匀浆液（placental homogenate extraction，PHE)代替FBS用于hUC‑MSC再培养，从而获得hUC‑MSC原料细胞。本发明在未使用商品化无血清培养基的前提下，即可实现hUC‑MSC体外规模化制备，同时又解决了牛血清残留问题，并节省大量成本。

主权项

1.一种人脐带间充质干细胞规模化制备的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)在无菌条件下分别收集脐带和胎盘；(2)从脐带中分离提取出hUC‑MSC；将胎盘制备成胎盘匀浆液；(3)hUC‑MSC使用含胎牛血清的DMEM/F12进行若干代次体外扩增；(4)用含胎盘匀浆液的DMEM/F12继续培养若干代次；(5)消化收集细胞悬液，离心弃去上清液，即获得hUC‑MSC原料细胞；其中，所述胎盘匀浆液的制备方法如下：(2‑1)取胎盘，剥离羊膜，收集绒毛组织，并清洗；(2‑2)将绒毛组织进行匀浆；(2‑3)利用缓冲液重悬匀浆；(2‑4)在‑80℃的条件下冻存；(2‑5)在4℃的条件下反复冻融，然后进行低温超声破碎；(2‑6)离心，收集上清液，再对上清液进行过滤，并收集滤液，即得胎盘匀浆液；并且，所述胎盘与提取hUC‑MSC的脐带来源于同一个体。