[发明专利]一种以废弃海绵为载体的固定化芽胞漆酶及其制备方法

摘要

本发明公开了一种固定化芽胞漆酶及其制备方法，属于固定化技术领域。其以废弃海绵为载体，使用聚乙烯亚胺接枝，再通过双功能交联剂将芽胞共价结合到海绵上。本发明提供的固定化芽胞漆酶易于分离，可重复使用多次；该方法制备过程简单，原料价格低廉，易于生产，而且可以有效解决废弃海绵的回收再利用的问题。此外，本发明所提供的固定化芽胞漆酶可反复应用于染料脱色，并保持较高的脱色能力。

主权项

1.一种固定化芽胞漆酶，其特征在于，以废弃聚乙烯醇海绵为载体，通过共价结合作用将芽胞漆酶固定在海绵纤维表面，所述芽胞漆酶是指芽胞杆菌属菌株所产的具漆酶活性的芽胞，其具体制备方法包括以下步骤：(1)制备芽胞杆菌属菌株所产的芽胞；(2)海绵的预处理：将废弃海绵切割成2×2×2mm小块，95％乙醇浸泡过夜，反复洗涤，干燥至恒重；(3)聚乙烯亚胺涂敷与芽胞固定化：将预处理好的海绵按10－50mg/ml浸于水中，用0.1‑2.0mg/ml聚乙烯亚胺水溶液处理3－12h，然后用去离子水洗涤3次，收集聚乙烯亚胺涂敷好的海绵，自然干燥过夜；(4)加入芽胞悬液使终浓度为湿重1.0－10.0mg/ml，添加体积浓度为0.4－4％的戊二醛交联剂，并在4－40℃，pH 5.0－9.0缓冲液，50－250r/min条件下固定8－24h；(5)回收：芽胞与聚乙烯亚胺接枝的海绵经混合固定化处理后，过滤，用缓冲液冲洗1－5次，分别收集上清液和固定化芽胞，保藏于0－40℃。