[发明专利]利用核酸试纸条进行分型检测方法及其应用

摘要

本发明涉及一种利用核酸试纸条进行分型检测方法，包括如下步骤：1)制备用于分型检测的核酸试纸条；2)提取并用被生物素标记的引物通过PCR来扩增待检测的目的核酸；3)对步骤1)获得的试纸条在30-50摄氏度下进行提前温育，然后向步骤2)获得的扩增产物中加入扩展液和显色底物并混匀，向步骤1)制备得到的试纸条的样品垫上滴加1-100微升混匀后的混合物，再在30-50摄氏度下进一步温育，观察试纸条检测结果；4)制备标准板；5)将试纸条检测结果与标准板进行比对，获取具体的检测型别。本发明还涉及另一种检测方法，以及所述检测方法的应用。

主权项

一种利用核酸试纸条进行分型检测的方法，包括如下步骤：1)制备用于分型检测的核酸试纸条：1‑1)制备依次包括样品垫、连接垫、纤维膜和吸附垫，纤维膜上依次设置有两条或两条以上的检测线和一条或多条控制线的试纸条；1‑2)在连接垫处用碱性磷酸酶处理；1‑3)在两条或两条以上的检测线处分别用与待检测的目的分型型别对应的特异性探针处理；1‑4)在控制线处用与扩增待检测目的核酸的PCR所用的上游引物和/或下游引物反向互补的通用探针处理；2)提取并用被生物素标记的上游引物和/或下游引物通过PCR来扩增待检测的目的核酸，得到扩增产物；3)对步骤1)获得的试纸条在30‑50摄氏度下、优选38‑42摄氏度下进行提前温育，然后向步骤2)获得的扩增产物中加入扩展液和显色底物并混匀，向步骤1)制备得到的试纸条的样品垫上滴加1‑100微升，优选为5‑20微升，更优选为8‑12微升混匀后的混合物，再在30‑50摄氏度下、优选38‑42摄氏度下进一步温育5‑60分钟、优选10‑30分钟、更优选13‑17分钟，观察试纸条检测结果；4)制作标准板：按照预先设定好的各检测线对应的型别制备用于分型检测的核酸试纸条大小相同的纸板，在与用于分型检测的核酸试纸条中各检测线对应的位置分别标示具体型别，在与用于分型检测的核酸试纸条中控制线对应的位置标示控制线；5)将试纸条检测结果与标准板进行比对，获取待检测的目的核酸的分型结果。