[发明专利]N-氨甲酰-D-对羟基苯甘氨酸水解酶突变体及其工程菌的构建

摘要

N‑氨甲酰‑D‑对羟基苯甘氨酸水解酶突变体及其工程菌的构建，通过定向进化技术获得的5个突变体与N‑氨甲酰‑D‑对羟基苯甘氨酸水解酶的区别分别为：N‑氨甲酰‑D‑对羟基苯甘氨酸水解酶的氨基酸序列中第193位的半胱氨酸突变为天冬酰胺；第200位的苏氨酸突变为丙氨酸；第226位的天冬酰胺突变为酪氨酸；第243位的半胱氨酸突变为天冬酰胺；第250位的半胱氨酸突变为酪氨酸；并进行工程菌构建，将其应用于D‑对羟基苯甘氨酸的生产中，和野生酶相比，在对氧气的耐受性、酸碱的耐受性及酶活方面有很大提升。

主权项

1.一种 N‑氨甲酰‑D‑对羟基苯甘氨酸水解酶的突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列由以下任一项所述的氨基酸序列组成：N‑氨甲酰‑D‑对羟基苯甘氨酸水解酶的氨基酸序列中第 193 位的半胱氨酸突变为天冬酰胺；N‑氨甲酰‑D‑对羟基苯甘氨酸水解酶的氨基酸序列中第 200 位的苏氨酸突变为丙氨酸；N‑氨甲酰‑D‑对羟基苯甘氨酸水解酶的氨基酸序列中第 226 位的天冬酰胺突变为酪氨酸；N‑氨甲酰‑D‑对羟基苯甘氨酸水解酶的氨基酸序列中第 243 位的半胱氨酸突变为天冬酰胺；N‑氨甲酰‑D‑对羟基苯甘氨酸水解酶的氨基酸序列中第 250 位的半胱氨酸突变为酪氨酸；其中所述 N‑氨甲酰‑D‑对羟基苯甘氨酸水解酶的氨基酸序列为如 SEQ ID NO.2 所示的N‑氨甲酰‑D‑对羟基苯甘氨酸水解酶序列。