[发明专利]一种猪蓝耳病重组疫苗有效
| 申请号： | 201510462709.8 | 申请日： | 2015-08-01 |
| 公开（公告）号： | CN105002195B | 公开（公告）日： | 2018-08-10 |
| 发明（设计）人： | 李海燕;李晓薇;李玉;王法微;赵竟男;李校堃;王琦;刘秀明;姚娜;孙天旭;董园园;王南;王秀然;卢天成;王岩;孙喆 | 申请（专利权）人： | 吉林农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C07K19/00;C12N15/80;A61K39/00;A61P31/14 |
| 代理公司： | 长春市东师专利事务所 22202 | 代理人： | 张铁生 |
| 地址： | 130118 吉林省*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种猪蓝耳病重组疫苗，将猪蓝耳病病毒ORF3基因和ORF5基因串联，构建了融合基因ORF3‑ORF5，插入真菌特异性双T‑DNA安全表达载体pCB130NG中，获得一种表达载体pCB130NG‑ORF3‑ORF5，利用PEG法、农杆菌介导法或电击法转化食药用真菌原生质体，经鉴定为阳性的菌丝体，培养获得T1代子实体，利用PCR筛选出只含目的基因而不含选择标记基因的子实体个体，培养至T2代，获得稳定表达猪蓝耳病病毒基因的转基因食药用真菌。通过转基因真菌菌丝的发酵培养，离心收集菌丝，烘干或冻干后，粉碎制备猪蓝耳病重组疫苗。利用本发明生产的猪蓝耳病疫苗各批次间质量差异小、产量大、成本低，且可以直接通过口服饲喂动物，具有广泛的社会效益和经济效益。 | ||
| 搜索关键词： | 重组疫苗 猪蓝耳病病毒 食药用真菌 菌丝 表达载体 蓝耳病 子实体 种猪 农杆菌介导法 选择标记基因 猪蓝耳病疫苗 电击法转化 转基因真菌 发酵培养 离心收集 目的基因 融合基因 饲喂动物 稳定表达 原生质体 质量差异 猪蓝耳病 菌丝体 转基因 烘干 真菌 冻干 构建 制备 串联 基因 安全 生产 | ||
【主权项】：
1.一种表达载体pCB130NG‑ORF3‑ORF5，它是：1）用HindIII和EcoRI双酶切pCAMBIA1300载体，去除MCS区，经DNA聚合酶Klenow酶补平后，用T4连接酶连接形成中间载体pCB130‑1；2）在pCB130‑1的SphI位点处引入SEQ ID NO.1所示的基因，包含左右边界序列和多克隆位点，构建成中间载体pCB130‑2；3）pCB130‑2分别在PstI酶切位点处引入真菌特异性启动子GPD，在SacI与EcoRI酶切位点之间引入Nos终止子，构建成真菌特异性双T‑DNA表达载体，命名为pCB130NG；4）经Xbal和KpnI酶切，在pCB130NG中插入SEQ ID NO.4所示的基因。
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