[发明专利]一种牛奶中微生物DNA的提取方法在审
| 申请号： | 201510474702.8 | 申请日： | 2015-08-06 |
| 公开（公告）号： | CN106381294A | 公开（公告）日： | 2017-02-08 |
| 发明（设计）人： | 郝永清 | 申请（专利权）人： | 中创云牧科技咨询(北京)股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100048 北京市海淀*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种牛奶中微生物DNA的提取方法，包括取乳样0.8mL加入到0.3～0.5mL ES溶液(0.5mol/L EDTA(pH7.5)、0.2％SDS)中，混匀，离心，弃上清；加入0.8～1.2mL PBS缓冲液，振荡摇匀，离心，弃上清；加入20～30μL质量浓度为0.02mg/mL的溶葡萄球菌酶；加入150～200μL质量百分浓度为10％的Chelex-100水溶液，剧烈振荡5～10s，置于100℃沸水中加热8～12min；离心，最后取上清液用于PCR反应即可。本发明采用Chelex-100法可经济、快速、有效地从乳样中直接提取细菌DNA，用于PCR检测奶牛乳房炎主要致病菌。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 牛奶 微生物 dna 提取 方法 | ||
【主权项】：
一种牛奶中微生物DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取乳样0.8mL加入到0.3～0.5mL ES溶液中，混匀，然后在10000～15000r/min的转速下离心8～12min，弃上清；所述ES溶液含有0.5mol/L的EDTA和0.2wt％的SDS，所述EDTA的pH值为7.5；(2)加入0.8～1.2mL PBS缓冲液，振荡摇匀，然后在8000～12000r/min的转速下离心3～8min，弃上清；(3)加入20～30μL质量浓度为0.02mg/mL的溶葡萄球菌酶；加入150～200μL质量百分浓度为10％的Chelex‑100水溶液，剧烈振荡5～10s，置于100℃沸水中加热8～12min；接着在10000～15000r/min的转速下离心3～8min，最后取上清液用于PCR反应即可。
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