[发明专利]一种头孢菌素C酰基转移酶的纯化方法有效
| 申请号： | 201510475536.3 | 申请日： | 2015-08-06 |
| 公开（公告）号： | CN105018455B | 公开（公告）日： | 2019-01-04 |
| 发明（设计）人： | 唐阳刚;林楠棋;张书汁;刘佳;幸志伟;张欣;王悦璋 | 申请（专利权）人： | 焦作健康元生物制品有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/80 | 分类号： | C12N9/80 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 454003 河南省焦作市马*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种新的头孢菌素C酰基转移酶的纯化方法。该方法用盐析法替代柱层析法，不仅操作简单、生产周期短、成本低。而且产品的纯度高；从而可以大幅度提高我国高品质头孢菌素C酰基转移酶的产能，满足国内外市场的需求。 | ||
| 搜索关键词： | 头孢菌素C酰基转移酶 生产周期 柱层析法 高品质 盐析法 产能 替代 | ||
【主权项】：
1.一种头孢菌素C酰基转移酶的纯化方法，所述方法包括如下步骤：1）将头孢菌素C酰基酶发酵液降温至0‑10℃，离心，得到细胞沉淀物；2）向所述细胞沉淀物中加入磷酸盐溶液1，使细胞沉淀物重新悬浮，搅拌均匀，用8MPa的高压均质机将细胞破碎，降温至0‑10℃；所述磷酸盐溶液1与细胞沉淀物的重量比为5:1，磷酸盐溶液1为0.02mol/L、pH=8.0的磷酸氢二钾溶液；3）步骤2）得到的悬浮液离心，上清液即为头孢菌素C酰基转移酶粗品溶液；4）0‑10℃下，向步骤3）得到的头孢菌素C酰基转移酶粗品溶液中加入硫酸铵，硫酸铵在头孢菌素C酰基转移酶粗品溶液的浓度为2.0mol/L；搅拌1h，进行盐析，离心分离得到盐析沉淀物；向所述盐析沉淀物中加入磷酸盐溶液2，搅拌1h，离心，分离沉淀，在上清液中得到纯化后的头孢菌素C酰基转移酶；所述磷酸盐溶液2与所述盐析沉淀物的重量比为7.5:1，磷酸盐溶液2为0.02mol/L、pH=8.0的磷酸氢二钾溶液。
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