[发明专利]一种头孢菌素C酰基转移酶的纯化方法有效
申请号: | 201510475536.3 | 申请日: | 2015-08-06 |
公开(公告)号: | CN105018455B | 公开(公告)日: | 2019-01-04 |
发明(设计)人: | 唐阳刚;林楠棋;张书汁;刘佳;幸志伟;张欣;王悦璋 | 申请(专利权)人: | 焦作健康元生物制品有限公司 |
主分类号: | C12N9/80 | 分类号: | C12N9/80 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 454003 河南省焦作市马*** | 国省代码: | 河南;41 |
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摘要: | 本发明提供了一种新的头孢菌素C酰基转移酶的纯化方法。该方法用盐析法替代柱层析法,不仅操作简单、生产周期短、成本低。而且产品的纯度高;从而可以大幅度提高我国高品质头孢菌素C酰基转移酶的产能,满足国内外市场的需求。 | ||
搜索关键词: | 头孢菌素C酰基转移酶 生产周期 柱层析法 高品质 盐析法 产能 替代 | ||
【主权项】:
1.一种头孢菌素C酰基转移酶的纯化方法,所述方法包括如下步骤:1)将头孢菌素C酰基酶发酵液降温至0‑10℃,离心,得到细胞沉淀物;2)向所述细胞沉淀物中加入磷酸盐溶液1,使细胞沉淀物重新悬浮,搅拌均匀,用8MPa的高压均质机将细胞破碎,降温至0‑10℃;所述磷酸盐溶液1与细胞沉淀物的重量比为5:1,磷酸盐溶液1为0.02mol/L、pH=8.0的磷酸氢二钾溶液;3)步骤2)得到的悬浮液离心,上清液即为头孢菌素C酰基转移酶粗品溶液;4)0‑10℃下,向步骤3)得到的头孢菌素C酰基转移酶粗品溶液中加入硫酸铵,硫酸铵在头孢菌素C酰基转移酶粗品溶液的浓度为2.0mol/L;搅拌1h,进行盐析,离心分离得到盐析沉淀物;向所述盐析沉淀物中加入磷酸盐溶液2,搅拌1h,离心,分离沉淀,在上清液中得到纯化后的头孢菌素C酰基转移酶;所述磷酸盐溶液2与所述盐析沉淀物的重量比为7.5:1,磷酸盐溶液2为0.02mol/L、pH=8.0的磷酸氢二钾溶液。
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