[发明专利]利用SNP标记rs4208349鉴别蜂群王浆高产性状的方法

摘要

本发明涉及一种利用SNP标记rs4208349鉴别蜂群王浆高产性状的方法，包括蜜蜂个体取样、蜜蜂样本DNA提取、引物合成、PCR检测和鉴别蜂群王浆高产性状，根据从该蜂群中随机收集的工蜂个体在该SNP标记rs4208349出现A等位基因的频率P_A和G等位基因的频率P_G之间是否存在显著差异，鉴别蜂群王浆高产性状。本发明从分子生物学水平，提供了使用意大利蜜蜂工蜂个体王浆高产相关的SNP（rs4208349）标记科学、准确、快速地鉴别意大利蜜蜂蜂群王浆高产性状，可以大大缩短王浆高产意大利蜜蜂品种的选育周期，加快蜜蜂育种速度。

主权项

一种利用SNP标记rs4208349鉴别蜂群王浆高产性状的方法，其特征在于鉴别步骤如下：（1）蜜蜂个体取样：从考察的意大利蜜蜂蜂群中，随机收集成年蜜蜂工蜂个体，每群以50只蜜蜂代表整个蜂群，将蜜蜂样本放于‑20℃冰箱中冷冻备用；（2）蜜蜂样本DNA的提取：分别取步骤（1）中冷冻蜜蜂样本的头部和胸部，进行组织破碎，提取基因组DNA，并进行浓度和纯度测定；（3）合成引物：引物对Primer‑F和Primer‑R的序列如下：Primer‑F：5’‑ AAATCCCTCCTCCGATTCAC ‑3’Primer‑R：5’‑ CATCCCTCCAACTGGTCCTA ‑3’；（4）PCR检测： 以步骤（2）蜜蜂DNA为模版，以Primer‑F和Primer‑R为引物进行PCR；反应的体系为：总体积30μL，内含反应混合物Mix 15μL，Primer‑F 1μL，Primer‑R 1μL，DNA模版 2μL，ddH₂O 11μL；反应的条件为： 94 ℃预变性5min；94℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸1 min，共35个循环；72℃延伸8 min；对PCR反应产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，将出现目的条带的PCR反应液进行测序；（5）鉴别蜂群王浆高产性状：将步骤（4）的测序结果用Alignment软件进行序列比对分析，根据蜂群的G等位基因频率P_G值，鉴别蜂群王浆高产性状。