[发明专利]小鲵科动物视网膜显微组织切片的制备方法

摘要

本发明公开了一种小鲵科动物视网膜显微组织切片的制备方法，属于显微组织切片技术领域。该方法包括以下步骤(1)将小鲵科动物的眼球完整无损的取出，并修剪多余组织；(2)将采集的眼球置于固定液中，固定后冲洗备用；(3)将经固定处理的眼球组织依次浸入浓度梯度乙醇中脱水，每个梯度脱水45～60min；(4)将经脱水处理的眼球浸入100％乙醇与二甲苯的混合液中2～3min，取出后再浸入二甲苯中10～30min；(5)将经透明处理的眼球放入二甲苯与石蜡的混合液中20～30min，取出后再分两次放入石蜡中，每次45～60min；(6)将经浸蜡处理的眼球包埋，依次经切片、展片、贴片、烤片、染色、封固处理，即得；其流程简单，操作方便，获得的切片完整，图片结构清晰。

主权项

小鲵科动物视网膜显微组织切片的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）取材：将小鲵科动物的眼球完整无损的取出，并修剪多余组织；（2）固定、冲洗：将采集的眼球置于固定液中，固定后冲洗备用；（3）脱水：将经固定处理的眼球组织依次浸入浓度梯度50%、70%、80%、90%、95%、100%的乙醇中脱水，其中95%、100%乙醇各重复两次，每个梯度脱水45~60min；（4）透明：将经脱水处理的眼球组织浸入100%乙醇与二甲苯的混合液中2~3min，取出后再浸入二甲苯中10~30min；所述100%乙醇与二甲苯的体积比为1:1；（5）浸蜡：将经透明处理的眼球组织放入二甲苯与石蜡的混合液中20~30min，取出后再分两次放入石蜡中，每次45~60min；所述二甲苯与石蜡的体积比为1:1；（6）将经浸蜡处理的眼球组织包埋，依次经切片、展片、贴片、烤片、染色、封固处理，即得；所述切片的厚度为4~6μm，切片后置于42~45℃的水中展片；所述贴片、烤片为：待切片自然伸展平后从水中取出，控干水分，置于37~45℃下干燥2~4h，或者于室温下自然干燥一夜；所述染色为H.E染色，操作步骤为：将切片依次置于二甲苯Ⅰ10min、二甲苯Ⅱ10min、100%乙醇Ⅰ5min、100%乙醇Ⅱ5min、95%乙醇5min、85%乙醇5min、75%乙醇5min、水5min、苏木精染液10~20min，流水冲洗5min，再置于HCl‑乙醇分化液20~40s，流水冲洗10~30min，镜检，流水冲洗2min，再依次置于70%乙醇1min、85%乙醇1min、伊红染液2min、95%乙醇Ⅰ2min、95%乙醇Ⅱ2min、100%乙醇Ⅰ2min、100%乙醇Ⅱ2min、二甲苯Ⅰ5min、二甲苯Ⅱ5min。