[发明专利]一种鸭肠道抗菌肽的提取方法

摘要

本发明公开了一种鸭肠道抗菌肽的提取方法，它包括如下具体步骤：（1）抗菌肽粗制品的制备；(2)抗菌肽粗制品的纯化。本发明方法具有操作简单、分离提取率高、成本低的特点，适用于较大量的从鸭肠中分离纯化抗菌肽。

主权项

一种鸭肠道抗菌肽的提取方法，其特征在于，它包括如下具体步骤：1）粗制品的制备(1)取鸭肠黏膜用灭菌生理盐水冲洗；(2)按1：1(W/V)比例加入5%乙酸；(3)用组织捣碎机捣碎3次，每次2min；(4)100℃水浴10min，然后迅速冷却，8000 rpm 离心30min弃沉淀，收集上清液；(5)上清液置冰上超声波破碎10次，每次3s；4℃搅拌浸提24h，8000r/min 离心30min，取上清液；(6) 将沉淀物用等体积5%乙酸混合，再次搅拌浸提，离心取上清液；(7) 合并两次上清液，调pH值至7.0，8000r/min离心30min取上清液；(8)上清液冷冻干燥；2）抗菌肽粗制品的纯化：将上清液上样于Sephadex G‑50凝胶过滤层析柱(1.6×60cm)，用0.1mol/L乙酸钠溶液(pH7.0)进行洗脱，恒流泵的速度为3×1，紫外检测仪检测其在280nm处的吸光值，记录仪记录(量程200mV，纸速度为6cm/h)，自动部分收集器收集，每管约2mL；检测各收集管洗脱液对大肠杆菌的抑菌活性，收集有抑菌作用的洗脱液，用截留分子量为l0kD的超滤离心管于5000g条件下离心30min，有抑菌活性的滤过物冷冻干燥，‑20℃保存。