[发明专利]携带人乳头瘤病毒16型突变型E7m94抗原基因的重组腺相关病毒载体及其构建方法与应用

摘要

本发明一种携带HPV‑16 E7m94抗原基因的重组腺相关病毒载体及其构建方法，是将具有致瘤性的HPV‑16的E7抗原基因突变为无致瘤性的E7抗原基因，再将该突变后基因插入已经剔除结构基因的腺相关病毒载体中而获得的。本发明的重组腺相关病毒可将其携带的突变型抗原基因输送入单核细胞‑树突状细胞系中，被用于刺激免疫系统的效应细胞。实验证明，被本发明重组腺相关病毒感染的DC所诱导的CTL可有效地抑制HPV‑16E7阳性细胞的生长或者杀灭HPV‑16E7阳性的细胞。该重组腺相关病毒载体或其相关产品可被用于制备治疗HPV‑16感染及其相关的抗肿瘤药物。

主权项

一种携带人乳头瘤病毒16型突变型E7m94抗原基因的重组腺相关病毒载体，是将目的基因突变型HPV‑16 E7m94抗原基因或野生型HPV‑16 E7抗原基因插入腺相关病毒载体中，获得携带HPV‑16 E7m94抗原基因的重组腺相关病毒载体或携带HPV‑16 E7抗原基因的重组腺相关病毒载体；所述突变型HPV‑16E7m94抗原基因是将HPV‑16 E7抗原基因的E7抗原蛋白第94位的半胱氨酸(G)改变为甘氨酸(C)对应的基因，即，将HPV‑16 E7基因开放读码框(nt280)的胸腺嘧啶(T)替换为鸟嘌呤(G)，将编码半胱氨酸的tgt(nt280‑282)改变为编码甘氨酸的ggt，获得可以表达无致瘤性的突变型HPV‑16 E7m94基因；所述HPV‑16 E7m94基因的核苷酸序列如序列表中序列1。所述腺相关病毒载体为剔除腺相关病毒(AAV)结构基因Rep和Cap的腺相关病毒载体，其携带的启动子为AAV p5启动子、巨噬细胞病毒(cytomegalovirus，CMV)启动子、人beta肌动蛋白启动子或SV40病毒早期启动子中的任意一个，所述携带HPV‑16 E7m94抗原基因的重组腺相关病毒载体统称为“E7m94重组腺相关病毒载体”或AAV/HPV‑16E7m94。所述重组腺相关病毒载体的制备方法，包括以下步骤：1)将HPV‑16 E7抗原蛋白的第94位半胱氨酸突变为甘氨酸，即将HPV‑16 E7基因开放读码框(nt280)的胸腺嘧啶(T)替换为鸟嘌呤(G)，即将编码半胱氨酸的tgt改变为编码甘氨酸的ggt，获得无致瘤性的突变型HPV‑16 E7m94基因；2)将HPV‑16 E7m94抗原基因或野生型HPV‑16 E7抗原基因插入所述E7m94重组腺相关病毒载体中，得到携带HPV‑16 E7m94抗原基因的重组腺相关病毒载体或携带HPV‑16 E7抗原基因的重组腺相关病毒载体。