[发明专利]一种金线莲种苗的扩繁方法

摘要

本发明涉及一种金线莲种苗的扩繁方法，其包括外植体的培养和接种、通过摇床进行高效率扩繁、固体培养基内生长培养、固体培养基内生根培养和炼苗及种植步骤。本发明采用MS大量元素和MS微量元素作用于培养物的矿物营养；糖作为植物细胞的碳源，提供建成纤维素的来源，同时对培养基形成一定的渗透压，以便培养物启动生长；6‑BA作为细胞分裂素，促进植株分裂出新的芽；NAA作为诱导素与6‑BA搭配使用；KT作为激动素，防止植株玻璃化。本发明的扩繁方法步骤简单，生产周期与传统工艺相比大幅减短，成本也降低，对环境友好，无污染，适合工业化生产，既能大幅度提高金线莲的种苗培育效率，又可提高整个市场金线莲产品的质量。

主权项

一种金线莲种苗的扩繁方法，其特征在于包括如下步骤：（1）外植体的培养和接种：挑选高度为7~10cm、带有4~6片叶、具有3~4节间的成年金线莲原种植株，在至少连续三个太阳照射之后的晴天，采集整株植株作为外植体，先用碱性清洁剂清洗，再用清水反复冲洗至无泡沫为止；然后将外植体灭菌，灭菌后无菌切去叶片、顶芽和根须，切1~2节间为一段，接种到J1固体培养基中，进行诱导休眠芽生长，诱导培养条件为：光照强度3000~5000Lx，光照时间16~18小时/天，温度22~28℃，培养时间35~45天；休眠芽诱导成功后，挑选强壮的植株作为扩繁种苗；（2）通过摇床进行高效率扩繁：将扩繁种苗移入到J2液体培养基中，放置于摇床上进行第一次继代培养，第一次继代培养条件为：摇床光照强度3000~5000Lx，温度22~28℃，摇动频率95次/分钟，培养时间20天；第一次继代培养获得扩繁比率为1：（20~30）的胚芽体，然后将胚芽体切分为2~3个主苗，发芽较多的主苗留在摇床上用新的J2液体培养基继续培育新芽，进行第二次的继代培养，其余主苗移入J1固体培养基作种植前期培养；（3）固体培养基内生长培养：移入J1固体培养基中的主苗作种植前期培养，培养条件为：光照强度3000~5000Lx，光照时间16~18小时/天，温度22~28℃；每35天继代培养1次，每次继代培养时都有一部分主苗长成3~5cm高的成熟种苗，成熟种苗移入J3固体培养基作生根培养；其余主苗继续在J1固体培养基中进行生长培养；（4）固体培养基内生根培养：移入J3固体培养基中的成熟种苗作生根培养，培养条件与步骤3中生长培养条件相同或直接连瓶移入种植大棚苗床上培养，培养35~45天即可见生出大量根须，此时便可开始炼苗；（5）炼苗及种植：将生出大量根须的成熟种苗放置于种植大棚苗床上，每天打开瓶盖1~2次，过10~15天后取出，将培养基洗净，即可进行种植；所述步骤（1）和（3）中J1固体培养基的组成及含量为：1/2MS大量元素，全量MS铁盐，全量MS微量元素，全量MS有机类常规，6‑苄氨基嘌呤4mg/L，6‑糠氨基嘌呤0.2mg/L，蔗糖25g/L，麦芽糖5g/L，琼脂粉3g/L，PH值5.8，常规灭菌；所述步骤（2）中J2液体培养基的组成及含量为：1/2MS大量元素，全量MS铁盐，全量MS微量元素，全量MS有机类常规，6‑苄氨基嘌呤4mg/L，6‑糠氨基嘌呤0.2mg/L，蔗糖25g/L，麦芽糖5g/L，PH值5.8，常规灭菌；所述步骤（4）中J3固体培养基的组成及含量为：1/2MS大量元素，全量MS铁盐，全量MS微量元素，全量MS有机类常规，萘乙酸5mg/L，6‑苄氨基嘌呤2.5mg/L，6‑糠氨基嘌呤0.2mg/L，蔗糖25g/L，麦芽糖5g/L，琼脂4g/L，PH值5.8，常规灭菌。