[发明专利]稳定表达H1N1流感病毒RNPs的Hela细胞株的构建方法在审
| 申请号： | 201510497967.X | 申请日： | 2015-08-13 |
| 公开（公告）号： | CN106434746A | 公开（公告）日： | 2017-02-22 |
| 发明（设计）人： | 房师松;王昕;丁小满;张仁利 | 申请（专利权）人： | 深圳市疾病预防控制中心 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10 |
| 代理公司： | 深圳中一专利商标事务所44237 | 代理人： | 张全文 |
| 地址： | 518000 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明适用于物医学领域，提供了一种稳定表达H1N1流感病毒RNPs的Hela细胞株的构建方法，包括以下步骤：构建重组质粒pcDNA3.1/Zeo-PB1、pcDNA3.1/Hygro-PB2、pcDNA3.1/Neo-PA、pEF6/V5-HisA-NP；获取四种抗生素Zeocin、Hygromycin B、Geneticin、Blasticidin S HCl感染Hela细胞的最佳筛选浓度；将所述重组质粒pcDNA3.1/Zeo-PB1、pcDNA3.1/Hygro-PB2、pcDNA3.1/Neo-PA、pEF6/V5-HisA-NP分次转染Hela细胞，筛选获得Hela-RNP细胞株。 | ||
| 搜索关键词： | 稳定 表达 h1n1 流感病毒 rnps hela 细胞株 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种稳定表达H1N1流感病毒RNPs的Hela细胞株的构建方法，包括以下步骤：分别设计H1N1流感病毒核糖核蛋白RNPs的扩增引物，PCR扩增目的片段PB1、PB2、PA和NP，构建重组质粒pcDNA3.1/Zeo‑PB1、pcDNA3.1/Hygro‑PB2、pcDNA3.1/Neo‑PA、pEF6/V5‑HisA‑NP；提供Hela细胞，分别使用四种抗生素Zeocin、Hygromycin B、Geneticin、Blasticidin S HCl感染所述Hela细胞，获取所述四种抗生素Zeocin、Hygromycin B、Geneticin、Blasticidin S HCl的最佳筛选浓度；提供Hela细胞，将所述重组质粒pcDNA3.1/Zeo‑PB1、pcDNA3.1/Hygro‑PB2、pcDNA3.1/Neo‑PA、pEF6/V5‑HisA‑NP分次转染Hela细胞，筛选获得稳定表达H1N1流感病毒RNPs的Hela细胞株。
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