[发明专利]一种单染色分离方法、单染色体高通量测序文库的构建方法及应用

摘要

本发明提供了一种单染色体分离方法、单染色体高通量测序文库的构建方法及应用。本发明提供了的技术方案，先通过计算机模拟实验，获得最佳的稀释参数，然后通过稀释法对单个细胞中的染色体进行分离，获得单染色体，再进行高通量测序以及生物信息学分析，从而判断出变异基因是来源于同源染色体中的父方还是母方。相比将同源染色体作为一个混合样品进行测序，本发明采用稀释法分离获得单染色体，可用于单倍型测序，对科研以及临床均有重要应用价值。

主权项

一种单染色分离方法，其特征在于，包括如下步骤：S01)模拟实验采用随机数产生方法建模，获得验证实验所需要的稀释容器的最佳数目，包括如下步骤：a)待分析物种染色体数记为X，并分别编号为S_n，n＝1‑X，n和X为自然数；b)在1‑Z个数中随机产生X个数；将X个数分别对应为染色体编号，每个S_n各对应X个数中的一个数值；将Z个数均等分布在N个稀释容器中，其中Z、X为自然数，Z不小于X；重复步骤b)T次；c)计算步骤b)T次模拟实验中，每次模拟实验后各稀释容器中对应的数字，记录为对应染色体的种类和数量；d)将所有模拟实验步骤c)所得的数据进行统计学分析，获得如下PHC、及P1～P3四个参数：1)处于同一个稀释容器中的同源染色体的数量，记为PHC；2)将所有同源染色体完全分开的实验的频率，记为P1；3)只含有1条染色体的稀释容器的频率，记为P2；4)完全不含染色体的稀释容器的频率，记为P3；综合四个参数评估出总共所需要的稀释容器的最佳数目Q，其中，Q为不大于N的自然数。S02)进行验证实验获得待分析物种分裂中期至中后期任一阶段的单细胞，取全部染色体，采用梯度稀释法将全部染色体稀释到Q个稀释容器中，获得至少有1个为仅含有单染色体的稀释容器。