[发明专利]分泌胞外物质溶藻的溶藻微生物的高通量筛选方法

摘要

本发明属于微生物技术领域，涉及一种高通量的筛选溶藻微生物的方法。包括1）、菌落的连续批量传代；2）、藻类的双层平板制备；3）、菌落溶藻效果的高通量检测与溶藻菌的分离。本发明方法替代基于传统接种针/环的常规筛选技术，对于提高溶藻微生物的筛选效率具有重要意义。

主权项

1.分泌胞外物质溶藻的溶藻微生物的高通量筛选方法，其特征在于：具体过程包括如下步骤：1）底泥菌悬液的制备称取1g底泥加到锥形瓶中，然后加入50ml灭菌的生理盐水，再加入玻璃珠，置于摇床中，25℃，160r/min震荡lh，然后静置备用；2）平板影印接种菌取底泥菌悬液倒入清洁的灭菌培养皿内，用接种影印工具沾取菌悬液后放置于事先制备好的高氏一号固体平板上，盖上平皿盖25℃倒置培养；3）平板影印传代待平板中菌落明显但又尚未黏连融合时，采用无菌操作，用同一接种影印工具沾染原平板上对应的菌落，再转印于另一个含有高氏一号培养基的平板上面进行传代，盖上平皿盖25℃倒置培养，如此重复传代5~8代；将原代平板于4℃保藏待用；4）双层平板制备：底层平板：将预培养的3mL铜绿微囊藻FACHB 905和融化并冷却到7ml 50℃的BG11培养基混均后迅速倾注到10cm培养皿中形成底层平板；上层平板：待底层平板凝固后，在底层平板上倾注融化并冷却至50℃的高氏一号培养基，10mL/皿，待上层培养基凝固后，将平板置于25℃，光照强度 620lux，光暗比12h:12h的光照培养箱中倒置培养3天；5）溶藻微生物菌落识别：用接种影印工具将将步骤3）所得的最后一代子代菌落平板的影印于双层平板上，将平板置于25℃，光照强度 620lux，光暗比12h:12h的光照培养箱中倒置培养观察1~5天，记录有抑藻圈出现的菌落，在原代平板上挑取相同或相应位置的菌落采用平板划线法分离纯化溶藻微生物；6）纯化后的溶藻微生物溶藻效果检测：将纯化后的菌落接种至高氏一号液体培养基，25℃，150r/min振荡培养3天后，按1:10（V/V）接种至对数期的铜绿微囊藻FACHB 905藻液中，光照培养箱 25℃，光照强度 2000lx，光暗比12h：12h培养3~5天，观察藻的生长情况；对照组为将高氏一号液体培养基按1:10（V/V）添加至藻液中。