[发明专利]一种产中性蛋白酶的凝结芽孢杆菌Liu-g1活菌制剂的制备方法

摘要

本发明涉及一种产中性蛋白酶的凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)Liu‑g1(CGMCC No.10790)活菌制剂的制备方法，适用于畜禽水产养殖业中饲用功能性活菌制剂的生产。本发明利用筛选自传统干酪的一种产中性蛋白酶的凝结芽孢杆菌Liu‑g1菌株，经过活化、扩大培养、高密度发酵、离心浓缩和冷冻干燥等工序制备成高活菌数的活菌制剂。本发明通过对发酵培养基和发酵条件的优化，利用全自动发酵罐发酵使Liu‑g1菌株的活菌数量可达9.0×109CFU/mL以上，冻干后活菌制剂的活菌数量可达1011CFU/g以上。本发明制备的活菌制剂价格低廉，活菌含量高，可作为禽畜饲料生物添加剂及微生态制剂，具有提高动物生长速度、节省饲料用量、减少发病率、降低饲养成本等特点。

主权项

1.一种产中性蛋白酶的凝结芽孢杆菌Liu‑g1活菌制剂的制备方法，其特征在于：发酵培养基配方为：1％玉米淀粉、1％大豆粕、0.2％碳酸钙，蒸馏水1000mL，pH7.5；将活化、扩大培养的凝结芽孢杆菌Liu‑g1以2％接种量移种到1L发酵培养基中，利用5L自动发酵罐进行高密度发酵，控制发酵温度45℃，发酵液初始pH7.5，搅拌转速180～220r/min，发酵时间48h，得到凝结芽孢杆菌Liu‑g1发酵液；将1L发酵液于4℃条件下，5000r/min离心20min，弃上清液，收集得到菌泥；将收集的菌泥加入到发酵液原体积1/10的含有10.5％麦芽糊精、4％马铃薯淀粉和5.5％乳清粉冻干保护剂中，混合均匀后，得到凝结芽孢杆菌Liu‑g1菌泥与冻干保护剂的混合物；将上述混合物于‑36℃低温冰箱中预冻12h至完全冻结状态，得到预冻活菌制剂；利用6L LABCONCO真空冷冻干燥机将预冻活菌制剂于冻干温度‑55℃、真空度0.18mBar的条件下，冻干48h至完全干燥状态，得到产中性蛋白酶的凝结芽孢杆菌Liu‑g1活菌制剂；凝结芽孢杆菌Liu‑g1已于2015年5月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No.10790。