[发明专利]原核表达重组质粒pET-IFNγ、干扰素及用途在审
| 申请号： | 201510506461.0 | 申请日： | 2015-08-18 |
| 公开（公告）号： | CN105018512A | 公开（公告）日： | 2015-11-04 |
| 发明（设计）人： | 袁雪梅;沈锦玉;潘晓艺;姚嘉赟;郝贵杰;蔺凌云;徐洋;尹文林 | 申请（专利权）人： | 浙江省淡水水产研究所 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12P21/02;C07K14/57;A61K38/21;A61P31/12 |
| 代理公司： | 湖州金卫知识产权代理事务所(普通合伙) 33232 | 代理人： | 裴金华 |
| 地址： | 313000 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及原核表达重组质粒pET-IFNγ、干扰素及用途。重组质粒pET-IFNγ，它是通过以下方法制备的：反转录-PCR扩增-连接到T载体-转化至大肠杆菌-质粒抽提-酶切-回收IFNγ片段-插入原核表达载体的多克隆位点-转化大肠杆菌-抽提质粒-酶切。为确定IFNγ重组蛋白在草鱼体内诱导ISG表达的效果，腹腔注射免疫草鱼，并通过实时荧光定量PCR方法检测草鱼肝、脾、肾、肠4种组织中基因的转录变化情况；与对照组相比较，这些ISG基因在4种组织中均被强烈诱导表达，其中大多数ISG基因在24h达到最高水平，在72h内回落到正常水平。这从另一个方面证实IFNγ重组蛋白的抗病毒效果。 | ||
| 搜索关键词： | 表达 重组 质粒 pet ifn 干扰素 用途 | ||
【主权项】：
原核表达重组质粒pET‑IFNγ，其特征在于它是通过以下方法制备的：（1）、以草鱼RNA为模板，用反转录试剂盒进行反转录和PCR扩增，制得扩增产物；（2）、扩增产物纯化后连接到T载体，制得连接产物；（3）、连接产物转化至大肠杆菌DH5ɑ，筛选阳性克隆产物；（4）、阳性克隆产物进行质粒抽提，用BamHⅠ、HindⅢ进行双酶切，酶切产物回收IFNγ片段，插入原核表达载体pET‑30a的多克隆位点，转化大肠杆菌DH5ɑ，然后抽提质粒进行酶切，得到重组质粒pET‑IFNγ；所述反转录试剂盒的引物如下：pET‑IFNγ‑U：CGCGGATCCgattcttggctcaacatgatpET‑IFNγ‑L：CCCAAGCTTtcattgaacctttttgtg。
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