[发明专利]一种富含甾醇的热带假丝酵母的培养方法

摘要

本发明涉及一种富含甾醇的热带假丝酵母培养方法，具体方法为，首先配制以游离脂肪酸或脂肪为唯一碳源的培养基。将配制好的培养基进行高温灭菌，冷却后，接种热带假丝酵母进行通气好氧发酵。发酵结束后，离心收集菌体，即获得富含甾醇的热带假丝酵母细胞。所获得的酵母细胞中甾醇含量可达到6.23％～7.12％，远高于普通方法，所产生的甾醇以谷甾醇和菜油甾醇为主，同麦角甾醇相比，谷甾醇和菜油甾醇用途更加广泛。

主权项

一种富含甾醇的热带假丝酵母的培养方法，其特征是，包括以下步骤：a、种子培养基的配制及灭菌：按配比在1L水中，加入20～30g葡萄糖、10～20g蛋白胨、5～10g酵母粉,按照所述配比，将各种成分称重后加入三角瓶中，室温下搅拌均匀，制得种子培养基；用8层纱布密封后放入高压灭菌锅中，于115℃～121℃灭菌15～20min，灭菌后把三角瓶冷却至室温；b、种子液的制备：挑取热带假丝酵母的斜面保藏菌种2～3环，接种到步骤a中所述的种子培养基中，于30℃、180～200rpm摇床振荡培养48h，备用；c、发酵培养基的配制及灭菌：于1L水中，加入40～50g游离脂肪酸或油脂(所述油脂为大豆油、花生油、菜籽油、棉籽油等)、1.0～2.0g酵母粉、0.1～0.2g硫酸镁、0.1～0.2g磷酸氢二钾、0.1～0.2g磷酸二氢钾；按照所述配比，将各种成分称重后加入机械搅拌式发酵罐中，室温下搅拌均匀，并用0.5M氢氧化钠溶液调节pH值6.8～7.0，制得发酵培养基；然后向发酵罐通入蒸汽开始灭菌，待罐温上升到115℃～121℃，保温30min，灭菌结束后，引入冷却水将发酵培养基温度降至25℃～30℃；d、发酵：将步骤b所述热带假丝酵母菌种子液以8％～10％接种量接种到步骤c所述发酵罐中的培养基之中，控制发酵温度28℃～30℃，机械搅拌转速220rpm～240rpm，通气量1.0～1.2vvm，pH值6.8～7.0,发酵96～108h。e、离心、洗涤：将步骤d所述的发酵液放置于离心机中，5000～5500rpm离心15～20min，弃上层残存的游离脂肪酸或油脂及清液，收集沉淀在离心机底部的菌泥(湿菌体)，按照1:50～1:80的比例加入50℃～60℃去离子水制成菌悬液，搅拌5～8min，然后再次进行离心，如此洗涤3次，得到热带假丝酵母湿菌体；f、干燥：将步骤e所述的热带假丝酵母湿菌体进行40℃～50℃冷风干燥，即获得富含甾醇的热带假丝酵母干菌体。