[发明专利]一种利用甘油生产丙烯酸的重组菌及其构建方法与应用

摘要

本发明公开了一种利用甘油生产丙烯酸的重组菌及其构建方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明所提供的重组菌是过表达甘油脱水酶基因，甘油脱水酶再激活酶基因，3‑羟基丙酰辅酶A脱水酶基因和丙醛脱氢酶基因。本发明的重组菌中构建了以甘油为原料，从头合成丙烯酸的代谢途径。同时，本发明还提供了该重组菌的构建方法以及应用方法。本发明以E.coli宿主菌，实现了以甘油为底物，在大肠杆菌这种模式菌株中首次合成得到丙烯酸，为丙烯酸的生产提供了新的技术方法。

主权项

1.一种重组菌的构建方法，所述重组菌过表达甘油脱水酶基因，甘油脱水酶再激活酶基因，3‑羟基丙酰辅酶A脱水酶基因和丙醛脱氢酶基因，所述甘油脱水酶基因，为来源于肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)的甘油脱水酶基因dhaBl23；所述甘油脱水酶再激活酶基因，为来源于肺炎克雷伯氏菌的甘油脱水酶再激活酶基因gdrAB；所述3‑羟基丙酰辅酶A脱水酶基因，为来源于橙色绿曲挠菌(Chloroflexus aurantiacus)的3‑羟基丙酰辅酶A脱水酶基因pcsII；所述丙醛脱氢酶基因，为来源于沙门氏菌(Salmonella typhimurium)的丙醛脱氢酶基因pduP，其特征在于，步骤如下：1)克隆获得甘油脱水酶基因dhaBl23，甘油脱水酶再激活酶基因gdrAB，3‑羟基丙酰辅酶A脱水酶基因pcsII和丙醛脱氢酶基因pduP；2)将步骤1)所得的3‑羟基丙酰辅酶A脱水酶基因pcsII和丙醛脱氢酶基因pduP连接到质粒载体上，获得重组质粒；所述pcsII基因是以Chloroflexus aurantiacus为模板，克隆丙酰辅酶A合成酶基因pcs的阅读框区域2566bp‑3552bp获得的；3)将步骤1)所得的甘油脱水酶基因dhaB l23和甘油脱水酶再激活酶基因gdrAB插入到宿主菌的丙酸调节子基因prpR座位上，得到宿主重组菌；所述宿主菌为大肠杆菌；4)将步骤2)所得的重组质粒导入到步骤3)所得的宿主重组菌中，获得重组菌。