[发明专利]快速生长人参细胞株及其大规模继代培养的方法

摘要

本发明公开了一种快速生长人参细胞株及其大规模继代培养的方法，其步骤如下：步骤一、人参愈伤组织诱导；步骤二、人参愈伤组织的扩增及继代培养；步骤三、人参不定根的诱导；步骤四、快速生长人参细胞株的初筛；步骤五、一株快速生长人参细胞株的筛选；步骤六、一株快速生长人参细胞株的大规模继代培养。本发明利用组织培养方法筛选快速生长人参不定根细胞株，并对此细胞株不定根进行逐级放大的大规模继代培养，比人参细胞培养更具有实际意义，不但其生长速率快，而且其活性次级代谢产物产率高且比较稳定，同时不受自然环境环境影响，具有操作工艺简单、重复性好、诱导率高、增殖速度快等特点。

主权项

一种快速生长人参细胞株及其大规模继代培养的方法，其特征在于所述方法步骤如下：步骤一、人参愈伤组织诱导：在超净工作台中用70‑95％的酒精清洗整株人参40‑60秒，再用无菌水冲洗人参2‑4次，用2‑5％的次氯酸钠溶液将冲洗过的人参完全浸泡12‑20分钟，再用无菌水冲洗3‑6次，将人参放在无菌滤纸上吸干其表面水分；用灭过菌的接种刀将人参切成0.2‑0.5cm厚0.7‑1.5cm²的小块接种到准备好的固体培养基上，在22‑28℃的条件下避光培养4‑5周，可见愈伤组织的形成；步骤二、人参愈伤组织的扩增及继代培养：将诱导出的愈伤组织接种在准备好的固体培养基上，在温度22‑28℃的条件下避光培养4‑5周；步骤三、人参不定根的诱导：将继代培养后的愈伤组织接种在准备好的固体培养基上，在温度为22‑28℃的条件下避光培养2个4‑5周，第1个4‑5周后经过一次转板，诱导得到人参不定根，并观察记录诱导出的人参不定根日期；步骤四、快速生长人参细胞株的初筛：根据人参不定根生根日期，选择粗细均匀的先诱导出的不定根切成长度相等的片段，接种在准备好的固体培养基上，在温度为22‑28℃的条件下避光培养4‑5周，每天观察记录其生长情况，初筛生长速度快的细胞株；步骤五、一株快速生长人参细胞株的筛选：将初筛的细胞株选择粗细均匀的不定根切成长度相等的片段，接种在准备好的固体培养基上，在温度为22‑28℃的条件下避光培养4‑5周，筛选出一株生长速度最快的细胞株；步骤六、一株快速生长人参细胞株的大规模继代培养：将筛选出的一株快速生长人参细胞株不定根接种在液体培养基中，在温度为22‑28℃的条件下避光培养4‑5周，从250ml小摇瓶经过1L大摇瓶、20L气升式反应器逐级扩大继代培养。