[发明专利]一种利用酶法制备特定分子量水溶性壳聚糖的方法

摘要

本发明属于生物技术领域，具体公开了一种利用酶法制备特定分子量水溶性壳聚糖的方法，该方法以脱乙酰度高于80%的壳聚糖为原料，溶胀后经专一性酶水解、控制反应终点、水解液浓缩、冷冻干燥等过程制备出特定分子量的水溶性壳聚糖。该方法通过控制酶添加量、反应时间和溶液粘度，可获得含量高、水溶性好、特定分子量的壳聚糖，且具有工艺简单、反应速度快、专一性强、成本低、安全环保等优点。

主权项

1.一种利用酶法制备特定分子量水溶性壳聚糖的方法，其特征在于：具体步骤如下：（1）粘均分子量曲线的获得先配制w/v 2%的壳聚糖溶液，之后利用已知酶和技术将其水解制备成一系列特定分子量的壳聚糖，测定反应液粘度和粘均分子量，以反应液粘度和粘均分子量绘制曲线；（2）溶胀：取壳聚糖原料于反应容器中，用水配制成w/v 2%～8%的壳聚糖溶液，加酸调节溶液的pH为4～6，不断搅拌，于40℃～60℃水浴中溶胀60～120分钟；（3）水解：按照壳聚糖质量以0.1U/g～6U/g的比例在反应容器中加入酶，开始反应，至理论酶解完全时间之前10～15分钟，开始每间隔5分钟取样一次，取样稀释至反应液浓度为w/v 2%，测定其溶液粘度，至预定粘度后水解过程结束，之后利用沸水浴灭酶10‑30分钟，结束反应，即得特定分子量的壳聚糖溶液；上述水解过程控制在60～150分钟；（4）干燥：将上述壳聚糖溶液冷却，经4000r/min～12000r/min离心机离心或滤布过滤，获得的壳聚糖澄清溶液直接喷雾干燥，或经旋转蒸发器浓缩至1/2～1/4体积后冷冻干燥，即得固体水溶性壳聚糖；所述步骤（2）水解过程所述酶为壳聚糖酶或甲壳素酶或甲壳素脱乙酰酶其中的一种或两种；制备5kDa～150kDa的目标产物，配制的壳聚糖溶液浓度为w/v 2%，按照壳聚糖质量以1U/g～6U/g的比例加入酶；所述步骤（1）中的壳聚糖原料为脱乙酰度大于80%的壳聚糖；所述步骤（2）中溶胀过程所述调节pH的酸为乙酸。