[发明专利]一种睾丸酮丛毛单胞菌HY-08D的培养方法

摘要

本发明涉及一种睾丸酮丛毛单胞菌HY‑08D的培养方法。包括以下步骤：将睾丸酮丛毛单胞菌株HY‑08D接种到斜面中，28‑32℃培养得活化斜面菌种；接种到摇床培养，得到一级种子液；进行扩大培养，通风比0.17‑0.25vvm，相对溶解氧浓度20‑40%，罐压0.08‑0.12MPa，得到睾丸酮丛毛单胞菌株HY‑08D二级种子液；进行扩大培养，控制通风比0.125‑0.21vvm制得高酶活睾丸酮丛毛单胞菌株HY‑08D转化用培养液。本发明单位体积培养液中菌体量较之前提高了40%以上、天冬氨酸脱羧酶酶活力提高了55%以上，效果显著。

主权项

1.一种睾丸酮丛毛单胞菌HY-08D的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）菌株HY-08D斜面菌种活化：将低温保存的睾丸酮丛毛单胞菌株HY-08D接种到装有活化培养基试管斜面中，28-32℃培养，挑取培养好的斜面菌苔接入另一支活化用试管斜面中，28-32℃培养，再转接另一斜面，28-32℃培养即得活化斜面菌种；（2）制备菌株HY-08D一级种子液：取步骤（1）得到的睾丸酮丛毛单胞菌株HY-08D活化斜面菌种，接种到装有培养基的三角瓶中进行培养， 28-32℃、摇床培养，得到一级种子液；（3）制备菌株HY-08D二级种子液：取步骤（2）得到的种子液以体积比1-1.5‰接种量转接到装有培养培养基的发酵罐中进行扩大培养，通风比0.15-0.25vvm，相对溶解氧浓度20-40%，搅拌转速根据溶解氧需求适当调节，罐压0.08-0.12MPa，28-32℃，培养，得到睾丸酮丛毛单胞菌株HY-08D二级种子液；（4）制备菌株HY-08D转化用培养液：将步骤（3）培养好的睾丸酮丛毛单胞菌株HY-08D二级种子液以体积比5-10%接种量转接到大发酵罐中进行扩大培养，控制通风比0.1-0.2vvm，相对溶解氧浓度20-40%，搅拌转速根据溶解氧需求适当调节，罐压0.08-0.12MPa，28-32℃培养，制得转化用培养液；所述的活化斜面培养基所必需的营养物质包括（g/L）：蛋白胨10；牛肉膏5；酵母膏5；氯化钠5；琼脂15-20，pH 7.0-7.2；步骤（2）、步骤（3）、步骤（4）中，所述菌株HY-08D培养所用培养基所必需的营养物质包括（g/L）：天冬氨酸5-8；谷氨酸钠7-12；葡萄糖3-8；酵母粉5-10；氯化钠3-6；玉米浆干粉5-12，pH 6.0-7.0。