[发明专利]一种促进肉类熟化的复合蛋白酶的制备及应用

摘要

本发明涉及一种促进肉类熟化的复合蛋白酶的制备及应用，属于提取生物活性产品技术领域。本发明以洗净的罗非鱼内脏为原料，通过组织粉碎和离心处理，并伴以超声辅助提取得到蛋白酶粗提液，再在磁力搅拌的同时加入茶多酚进行络合反应，以及加入磷酸盐缓冲液继续高速离心处理得到复合蛋白酶原液。在肉类熏烤前洒上复合蛋白酶，不仅没有任何危害人体健康的致癌物质产生，而且缩短了肉的熏烤时间，促进了肉的熟化，达到了腐而不烂，熟而不化的效果。实例证明，本发明方法独特新颖，将处理后的肉类进行熏烤，的确没有任何致癌物质产生，不仅香气扑鼻，延长了保质期，而且熏烤时间缩短，促进了肉类熟化，使得熟化速率提高了92％以上。

主权项

一种促进肉类熟化的复合蛋白酶的制备，其特征在于具体制备步骤为：（1）称取清洗干净的罗非鱼内脏400～500g，按照固液比1:4分别加入蒸馏水、石油醚、丙酮和工业己烷摇床振荡1～2h，再用组织捣碎机在4～6℃下捣碎30～40s，之后静置10～20min；（2）将捣碎后的罗非鱼内脏放入高速冷冻离心机于4～6℃、5000～7000r/min条件下离心10～20min，之后收集沉淀物，自然晾干后备用；（3）按固液比为1:5向上述沉淀物中加入pH为6～8的磷酸钾缓冲液，用组织捣碎机匀浆30～40s，在20～30℃下浸渍70～90min，之后将其移入超声波提取器于超声频率为15～20kHz，功率为50W的条件下，辅助提取4～6min；（4）将辅助提取液移入高速离心机，在4～6℃的条件下离心处理15～20min，离心转速为6000～8000r/min，提取上清液，得到蛋白酶粗提液；（5）取400～500mL粗酶液放置于磁力搅拌机上边搅拌边加入180～200g/L的茶多酚溶液，直至茶多酚终质量浓度为8g/L，之后继续搅拌30～40min，使其完全络合；（6）将上述络合物在3～4℃条件下放置5～7h，再在4～6℃下用离心机离心20～30min，离心转速9000～10000r/min，滤去上清液，将沉淀物用1/2原粗酶液体积的磷酸钾缓冲液溶解，4～6℃下静置24～36h，再高速离心30～40min，离心转速5000～7000r/min，取其上清液，利用液氮在－40～－30℃下进行瞬时灭菌，灭菌时间10～15s，即得一种促进肉类熟化的复合蛋白酶原液。