[发明专利]一种诱导DC-CIK细胞的化合物在肿瘤细胞免疫治疗中的应用

摘要

本发明属于生物治疗领域，涉及五肽UNAM化合物在肿瘤免疫治疗中的应用，实验研究表明，利用多肽诱导CIK或DC‑CIK细胞的培养方法，可以有效增强CIK或DC‑CIK细胞的增殖与分化作用，提高UNAM‑CIK或DC‑CIK免疫细胞的杀瘤活性，有望研发增加一种生物治疗新手段。

主权项

1.一种化合物在诱导制备CIK/DC‑CIK免疫细胞中的应用，其特征是，所述化合物选自UDP‑MurNAc‑L‑Ala‑γ‑D‑Glu‑L‑Lys‑D‑Ala‑D‑Ala，所述诱导制备CIK/DC‑CIK免疫细胞的步骤如下：步骤[1]外周血采集：无菌抽取肿瘤疾病患者外周血75ml，肝素钠抗凝并充分混匀，避免凝血；步骤[2]肿瘤抗原获取：室温2000rpm离心沉淀所采集外周血10分钟，收集5～10ml的上层血浆，将其加入UDP‑MurNAc‑L‑Ala‑γ‑D‑Glu‑L‑Lys‑D‑Ala‑D‑Ala‑DC‑CIK诱导培养基中；所得细胞沉淀物用于分离单个核细胞；步骤[3]单个核细胞分离：所得细胞沉淀物用生理盐水稀释混匀至原体积，轻轻加至淋巴细胞分离液表面，在650g条件下离心20分钟；步骤[4]收集单个核细胞：离心结束，用一次性塑料巴氏吸管收集淋巴细胞分离液表层细胞，移至50ml一次性塑料离心管中，加入生理盐水至50ml体积，混匀；步骤[5]单个核细胞洗涤：室温1000rpm离心沉淀10分钟，弃上清，沉淀物用生理盐水再次悬浮混匀，在室温1000rpm离心沉淀10分钟；步骤[6]UDP‑MurNAc‑L‑Ala‑γ‑D‑Glu‑L‑Lys‑D‑Ala‑D‑Ala‑DC‑CIK细胞的诱导、培养：离心结束后，弃上清，沉淀物用含UDP‑MurNAc‑L‑Ala‑γ‑D‑Glu‑L‑Lys‑D‑Ala‑D‑Ala的诱导培养基悬浮，并用白细胞稀释液稀释计数，均分至4个75cm²的一次性塑料细胞培养瓶中，补充UDP‑MurNAc‑L‑Ala‑γ‑D‑Glu‑L‑Lys‑D‑Ala‑D‑Ala‑DC‑CIK诱导培养基至50ml/瓶，置37℃、5％CO₂、饱和湿度的二氧化碳培养箱中进行培养，其间根据细胞的生长状况适时换液扩增，直至细胞数量达到回输所需。