[发明专利]一种A群脑膜炎球菌荚膜多糖结合疫苗的制备方法

摘要

本发明涉及一种A群脑膜炎球菌荚膜多糖结合疫苗的制备方法，包括以下步骤：A群流脑荚膜多糖的稀释、活化、与癸二酸二酰肼偶联到A群流脑多糖-癸二酸二酰肼衍生物；再将A群流脑多糖-癸二酸二酰肼衍生物与破伤风类毒素溶液在碳二亚胺的催化反应得到A群流脑荚膜多糖与载体蛋白的偶联物。本发明将癸二酸二酰肼作为A群流脑结合疫苗制备的过程中的偶联剂，癸二酸二酰肼相比己二酰肼在碳链上多2个亚甲基，分子链更长，更能克服生物大分子相互间的空间位阻，提高结合收率。

主权项

一种A群脑膜炎球菌荚膜多糖结合疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：B1：将A群流脑荚膜多糖用注射用水稀释成8mg/ml 的溶液,恒温至20℃，调节pH至10.50；B2：加入与B1所述多糖等质量的溴化氰进行活化处理，维持pH10.5活化 20分钟，调节pH至8.5；B3：加入与B1所述多糖溶液等体积、等浓度的癸二酸二酰肼溶液进行偶联反应，维持pH8.5反应15分钟；B4：将B3所得的反应物多次稀释‑超滤浓缩，去掉残余溴化氰，得到A群流脑多糖‑癸二酸二酰肼衍生物；B5：在B4所得的A群流脑多糖‑癸二酸二酰肼衍生物中加入与与B1所述多糖等质量的破伤风类毒素蛋白溶液，再用注射用水稀释，使多糖终浓度为3mg/ml；B6：将B5所得溶液混匀后置冰浴中，加入碳二亚胺粉末至终浓度为30 mmol ／ L，维持pH5.5，于2 ～ 8℃反应60分钟，调PH至7.0置2 ～ 8℃静置10小时；B7：将B6所得的反应物经Sepharose 4FF凝胶柱分离纯化，收集V₀附近的洗脱液，将收集到的洗脱液除菌过滤，得到A群流脑荚膜多糖与载体蛋白的偶联物。