[发明专利]一种过表达猪共刺激受体4‑1BB载体及其应用有效
| 申请号： | 201510547191.8 | 申请日： | 2015-08-31 |
| 公开（公告）号： | CN105087620B | 公开（公告）日： | 2017-12-29 |
| 发明（设计）人： | 李秋艳;索勋;黄广平;李志远;李向清;刘贤勇;付怡静;王一丁;田秀玲;索静霞;胡丹丹 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C12N15/85;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种过表达猪共刺激受体4‑1BB载体及其应用。PCR扩增rosa26基因内含子1左右同源臂，4‑1BB调控序列，OCT4特异启动子；将同源左臂、4‑1BB表达框、含LoxP位点的Cre、Neo表达框、同源右臂、负筛选DTA依次连接，得到4‑1BB同源重组载体p4BOCNDR。将该载体与含特异性靶向猪rosa26基因内含子1的sgRNA的CRISPR/Cas9打靶载体共转入猪胎儿成纤维细胞中，以阳性细胞为供体细胞，卵母细胞为受体细胞，通过体细胞核移植技术获得克隆胚胎；将克隆胚胎移入猪子宫内妊娠获得在rosa26基因第一内含子定点整合有4‑1BB基因且自动删除标记基因的转基因猪。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 表达 刺激 受体 bb 载体 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种4‑1BB基因的同源重组载体，其特征在于，通过以下方法制备得到：以目标生物基因组为模板，PCR扩增左右同源臂，4‑1BB表达框，胚胎期特异性调控元件OCT4；将同源左臂、4‑1BB表达框、含LoxP位点的OCT4调控的Cre表达框和Neo表达框、同源右臂、负筛选DTA依次连接，得到4‑1BB同源重组载体。
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