[发明专利]一种重组胰岛素及胰岛素类似物前体纯化方法有效
申请号: | 201510548164.2 | 申请日: | 2015-08-31 |
公开(公告)号: | CN105153294B | 公开(公告)日: | 2019-02-12 |
发明(设计)人: | 张颖;孔凡楼;姜寿俊;刘骏;郭凤霞;徐丹 | 申请(专利权)人: | 济南康和医药科技有限公司 |
主分类号: | C07K14/62 | 分类号: | C07K14/62;C07K1/18 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 250101 山东省济南*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | 本发明涉及胰岛素生产方法领域,公开了一种重组胰岛素及胰岛素类似物前体纯化方法。本发明为解决重组表达的胰岛素前体及胰岛素类似物前体在纯化制备过中存在的常规层析填料因不能耐受高盐上样、有机试剂用量大、成本高、产品纯度不高的问题,本发明采用以下技术方案:将离心后的发酵液上清经调节pH和离心后,直接上样经Capto S、Capto MMC、Uni PMM S、Uni MSP中的任何一种填料制备的层析柱进行吸附、分离纯化、洗脱,最终得到高纯度的重组胰岛素及胰岛素类似物前体;本发明与现有纯化方法相比操作简单,收率高,耗时短,对环境影响小,可大规模降低现有的胰岛素及胰岛素类似物的产品生产成本。 | ||
搜索关键词: | 一种 重组 胰岛素 类似物 纯化 方法 | ||
【主权项】:
1.一种重组胰岛素及胰岛素类似物前体纯化方法,包括以下步骤:(1)发酵液前处理:发酵液以酸调节pH,离心获得含胰岛素前体或胰岛素类似物前体蛋白的上清液,所得发酵液电导率范围在10‑55mS/cm之间;(2)平衡:用酸性平衡缓冲液平衡层析柱的柱床;(3)上样:将步骤(1)中的上清液上样至步骤(2)中的层析柱,然后用步骤(2)中的酸性平衡缓冲液冲洗未吸附的杂质;(4)洗脱:用碱性缓冲液洗脱步骤(3)中的层析柱,得重组胰岛素或胰岛素类似物前体的洗脱峰;所述层析柱中的层析填料为Capto S、Capto MMC、Uni PMM S、Uni MSP中的任何一种。
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