[发明专利]一种黄绿蜜环菌抗肿瘤活性成分的提取方法及其应用

摘要

本发明提供一种黄绿蜜环菌抗肿瘤活性成分的提取方法：以黄绿蜜环菌子实体为原料，磨成粉末后用乙酸乙酯浸泡，过滤取上清，浓缩至膏状；用正己烷-乙醇溶剂溶解，得上样溶液；一维液相色谱分离：采用Silica色谱柱，A正己烷、B乙醇二元流动相，B相浓度由0％至75％梯度洗脱，收集34-39分钟洗脱液，浓缩至膏状；用乙醇-正己烷溶剂溶解；二维液相色谱分离：采用Silica色谱柱，A正己烷、B乙醇二元流动相，B相浓度4％等度洗脱，收集11-16分钟洗脱液，浓缩至干，得目的成分。该方法得到纯度达97％的单体化合物，且该化合物被证明具有抗肺癌和抗肝癌活性，具有相关药物制剂开发潜力。

主权项

一种黄绿蜜环菌抗肿瘤活性成分的提取方法，其特征在于包括以下步骤：(1)以黄绿蜜环菌子实体为原料，经干燥并磨成粉末状后，用乙酸乙酯以液固比(5‑10)mL︰1g进行浸泡，然后过滤取上清，得到乙酸乙酯提取液，并浓缩至膏状；(2)使用乙醇体积分数为10‑35％的正己烷‑乙醇二元混合溶剂溶解步骤(1)得到的膏状乙酸乙酯提取物，得到100‑150mg/mL的上样溶液；(3)对上样溶液进行一维液相色谱分离：采用的色谱柱为Silica正相硅胶色谱柱，采用的流动相为二元混合有机相，其中A相为正己烷、B相为乙醇，进样量为50‑150mL/针，流动相流速为550‑600mL/min，检测器为紫外检测器，检测波长210‑260nm；采用的洗脱方式为B相浓度由0％至75％进行梯度洗脱45‑75min，根据紫外吸收光谱收集34‑39分钟洗脱液作为目的组分，减压浓缩至膏状，得到一维液相组分；(4)用乙醇体积分数为2‑15％的乙醇‑正己烷二元混合溶剂溶解一维液相组分，溶解至浓度为50‑100mg/mL；(5)进行二维液相色谱分离：采用的色谱柱为Silica正相硅胶色谱柱，采用的流动相为二元混合有机相，其中A相为正己烷、B相为乙醇，进样量为500‑2000μL/针，流动相流速为10‑30mL/min，检测器为紫外检测器，检测波长210‑260nm，采用的洗脱方式为B相浓度4％进行等度洗脱25‑35min，根据紫外吸收光谱收集11‑16分钟洗脱液作为目的组分，旋转蒸发浓缩至干，得到目的成分。