[发明专利]增加驴受胎率的冷冻精人工授精方法

摘要

本发明公开了一种增加驴受胎率的冷冻精人工授精方法，它包括鲜精的冷冻处理过程、冷冻精的解冻处理过程和诱导排卵定时输精过程。实施时，首先将采集到取活率≥70％的公驴的精液进行稀释放入全自动冷冻仪自动完成冷冻过程；给待孕母驴人工授精前，迅速置于38℃水浴瞬时解冻，并在1小时之内完成诱导排卵定时输精过程。采用本发明采用诱导排卵定时输精的技术措施情期受胎率可达70％。

主权项

一种增加驴受胎率的冷冻精人工授精方法，其特征在于，它包括鲜精的冷冻处理过程、冷冻精的解冻处理过程和诱导排卵定时输精过程，其中：鲜精的冷冻处理过程如下：(1)采用假阴道采集公驴的精液，精液经灭菌的4层消毒纱布过滤，除去胶冻，用肉眼观察原精液的颜色，正常精液色泽呈乳白、灰白色或淡黄色，取正常精液并记录原精液量，在配有38℃恒温装置的相差显微镜上评定活率，取活率≥70％的原精进行稀释；稀释按原精与稀释液1：1的比例等温稀释；稀释液按以下成分配比：Tris33—34g、柠檬酸8—9g、葡萄糖15—16g、甘油70—71mL、青霉素5万单位、链霉素5万单位：(2)稀释后的鲜精装入离心管中，在22℃恒温放置10分钟，在离心机上按每分钟1850转离心15每分钟，去掉离心管中的上清液，将粥状精液用冷冻稀释液按1：1的比例进行稀释；稀释时先加入冷冻稀释液稀释量的1/4，经初步稀释的精液在22℃下放置10分钟，然后，加入剩余的稀释液完全稀释；完全稀释的用0.5mL细管进行分装，然后超声波封口；把分装封口后的细管精液放入不透明的塑料盒内，再把塑料盒放入4℃的冷藏柜中平衡3～4小时；同时开启液氮罐阀门把全自动冷冻仪降温至4℃备用；把平衡后的细管精液迅速放入全自动冷冻仪，按照最佳冷冻曲线程序自动完成冷冻过程；冻冷冻过程后放入液氮罐中保存；所述的冷冻稀释液制作方法如下：取以下成分：三羟基三甲基甲烷33—34g、柠檬酸8—9g、葡萄糖15—16g、甘油70—71mL、青霉素5万单位、链霉素5万单位配制成稀释液，将适量稀释液装入量筒，量筒中再加入20％体积份的卵黄，用封口膜封口后，上下颠倒混匀，置于4℃冰箱中过夜分层；之后，去除上层泡沫，取稀释液中层倒入烧杯中沉淀，弃去下层沉淀物；经4000转/分离心3次，每次30分钟，离心后弃去表层杂质及底层沉淀物，倒入瓶中，加入适量甘油，用磁力搅拌器充分搅拌均匀，置于4℃冰箱中存放备用，存放时间不宜超过24小时；冷冻精的解冻处理过程是：给待孕母驴人工授精前，从液氮罐内取出精液细管，迅速置于38℃水浴瞬时解冻，解冻后用吸水纸擦干细管，剪去细管无棉塞一端的封口，安装在输精枪上，然后予以保温，并在1小时之内完成输精过程；诱导排卵定时输精过程是：在驴出现发情表现后的第7～10天内，人工将直肠B超探头经驴直肠送至卵巢部位，通过调整直肠探头在卵巢部位的扫描面，检测卵巢上卵泡发育的大小尺寸，当发现卵泡直径达到3.4‑3.5cm时，给驴注射300单位的促黄体素或绒毛膜促性腺素，使驴集中时间进行排卵，降低卵泡发育中闭锁的几率，并在排卵前10小时至排卵后6小时内、用输精枪实施两次人工输精，每次输精剂量5mL，确保驴精子与驴卵子在具有受精能力的时间内相遇完成受精过程，使驴受胎。