[发明专利]hTERT/HRE－Ad－SEA复合物的制备方法及用途

摘要

本发明涉及一种hTERT/HRE－Ad－SEA复合物的制备方法及其在膀胱癌治疗药物中的应用。包括以下步骤a.抗膀胱癌单克隆抗体BDI-1Fab段的制备及纯化；b.用化学连接剂3-(2-吡啶二巯基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯制备BDI-1Fab-SEA抗膀胱癌靶向超抗原；c.抗膀胱癌靶向超抗原的纯化；d.超抗原SEA基因克隆；e.携带超抗原SEA基因的hTERT/ HRE-1双调控增殖型溶瘤腺病毒载体pSG502-SEA的构建、重组和滴度测定。本发明制备的hTERT/HRE－Ad－SEA复合物对膀胱肿瘤具有生物学干预作用，能够抑制其生殖、分化，诱导其凋亡。

主权项

一种hTERT/HRE－Ad－SEA复合物的制备方法，其特征是：包括以下步骤：a.抗膀胱癌单克隆抗体BDI‑1Fab段的制备及纯化；b.用化学连接剂3‑(2‑吡啶二巯基)丙酸N‑羟基琥珀酰亚胺酯制备BDI‑1Fab‑SEA抗膀胱癌靶向超抗原；c.抗膀胱癌靶向超抗原的纯化；d.超抗原SEA基因克隆；e.携带超抗原SEA基因的hTERT/HRE‑1双调控增殖型溶瘤腺病毒载体pSG502‑SEA的构建、重组和滴度测定：应用PCR技术将引入SpeI和SalI酶切位点的超抗原SEA基因片段连接到经SpeI和SalI双酶切后的非增殖溶瘤腺病毒穿梭质粒pSG218中，将鉴定正确的非增殖溶瘤腺病毒载体命名为PDC318–SEA；PDC318–SEA经SpeI和SalI双酶切后将超抗原SEA基因片段连接到同样经SpeI和SalI双酶切后的增殖溶瘤腺病毒穿梭质粒PENTR‑12中，将鉴定正确的携带SEA基因增殖溶瘤腺病毒载体命名为PENTR12‑SEA；将携带SEA基因的增殖溶瘤腺病毒载体PENTR12‑SEA与病毒骨架质粒PPE3重组，得到重组腺病毒‑SEA质粒PPE3‑SEA；将PPE3‑SEA与hTERT/HRE‑1双调控增殖腺病毒质粒pSG502共转染至293细胞，共转染后9～14d出现病毒空斑，经过3次病毒空斑纯化，提取腺病毒DNA,应用PCR进行鉴定，经鉴定正确的hTERT/HIF‑1双调控溶瘤腺病毒命名为SG502‑SEA。