[发明专利]一种茶树DNA的提取方法

摘要

本发明涉及茶树DNA的提取方法，具体步骤如下：（1）取茶树嫩叶、成熟叶或茶树嫩根放研磨成粉末状；（2）取粉末放入离心管，依次加入水浴的提取液，β-巯基乙醇，60℃-70℃，水浴15-25min，得粗样品；（3）加入RNase-A混匀后，40℃水浴5min，得粗样品；（4）取出离心管先后加入Tris平衡酚和氯仿/异戊醇，混匀后离心得上清液；（5）将上清液用-20℃预冷无水乙醇，清洗两次；（6）将步骤（5）得到的沉淀物中加入45℃预热去离子水，放入45℃水浴锅中溶解，重复步骤（5）的操作一至两次，蒸发剩余乙醇，在加入200µL去离子水后获得DNA。本发明提取的茶树叶片的基因组DNA浓度高、提取时间短。

主权项

一种茶树DNA的提取方法，其特征在于，具体步骤如下：（1）取茶树嫩叶、成熟叶或茶树嫩根放置于液氮中研磨成粉末状；（2）将步骤（1）的粉末中取出0.2克放入2mL的离心管后，加入650μL水浴的提取液，所述的提取液由pH8.0；100mmol/L的Tris‑盐酸、pH8.0；20mmol/L的EDTA、1.0mol/L的氯化钠、w/v比例为4%的PVP、w/v比例为2%的CTAB/SDS组成，漩涡震荡充分混匀后，再加入15μL的β‑巯基乙醇，60℃‑70℃ ，水浴15‑25min，每隔5min混匀一次，得到粗样品；（3）水浴结束后加入10µL，10mg/mL 的RNase‑A混匀后，40℃水浴5min，得到粗样品；（4）取出离心管先后加入PH8.0；400µL的Tris平衡酚和400µL氯仿/异戊醇，漩涡震荡充分混匀后10000 rpm离心10min，获得上清液；（5）将步骤（4）的上清液移至一个新的2mL的离心管中，加入3倍上清液体积的‑20℃预冷无水乙醇，混匀，此时有DNA析出，倒去上清液，后再用1ml‑20℃预冷无水乙醇清洗一次，倒去上清液；（6）将步骤（5）得到的沉淀物中加入45℃预热的去离子水，再放入45℃水浴锅中溶解，重复步骤（5）的操作一至两次，10000rpm离心1min后，去上清液后再次空转10000rpm离心30s后放在常温真空干燥器中蒸发剩余乙醇，待沉淀微白时取出，加入200µL去离子水后获得DNA，后将提取的DNA放置‑20℃冰箱中备用。