[发明专利]六瓣红大蒜酶解产物HPLC指纹图谱的建立方法

摘要

本发明公开了一种宝坻“六瓣红”大蒜酶解产物HPLC指纹图谱的建立方法，具体步骤为将宝坻特有品种“六瓣红”大蒜鳞茎经固相萃取等步骤制备成供试品溶液，在一定条件下进行高效液相色谱分析检测，获得“六瓣红”大蒜酶解产物的HPLC指纹图谱。通过对10批次样品的HPLC指纹图谱分析，确定共有特征峰，得到标准指纹图谱。该标准指纹图谱能够为“六瓣红”大蒜的品种及产地鉴别和生产质量控制提供可靠的依据。本发明操作便捷，稳定性高，特异性强，重现性好，特征峰较多，分析效率高，利用本发明将能对“六瓣红”大蒜进行真伪及产地鉴别，并能全面、准确、有效的评价其内在品质质量。

主权项

一种六瓣红大蒜酶解产物HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于按如下的步骤进行：（1）大蒜酶解产物待测溶液的制备：称取六瓣红大蒜鳞茎20g破碎、研磨，加25‑30ml蒸馏水，50‑55℃温浴酶解1h，加甲醇定容至50ml，5000×g离心15min，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤；（2）大蒜酶解产物供试品溶液的制备：C18固相萃取小柱经5ml甲醇、10ml超纯水活化，平衡15min；待测溶液以4ml/min速度过柱，再用5ml超纯水淋洗，低真空抽干；再由5ml甲醇洗脱后，室温下低流速氮气浓缩至0.5‑0.8 ml，再以甲醇定容至1ml，经0.45μm微孔滤膜过滤待测；（3）参照物溶液的制备：精密称取二烯丙基二硫醚30.44 mg和二烯丙基三硫醚32.12 mg，溶于甲醇中定容至50ml，再吸取上述混合溶液1 ml用甲醇定容至10 ml，作为参照物；（4）高效液相色谱分析：色谱柱为：Eclipse Plus C18，5μm，4.6×250mm；保护柱为：Eclipse Plus C18 Grd，5μm，4.6×12.5mm；柱温35℃；流动相为甲醇和0.2%甲酸水溶液；采用梯度淋洗方式0→2 min→10 min→20 min，甲醇：70%→70%→80%→80%；二极管阵列检测器检测波长240nm；进样量50μL；在上述条件下分析供试品溶液，得到大蒜酶解产物HPLC指纹图谱；（5）重复上述（1）至（4），对10批次六瓣红大蒜酶解产物建立HPLC指纹图谱，通过比较分析确定了14个共有特征峰，其保留时间分别为：2.243 min、2.991 min、3.423 min、3.871 min、4.731 min、5.993 min、6.629 min、7.168 min、8.151 min、9.295 min、10.824 min、13.344 min、15.65 min、18.723 min，相对标准偏差（RSD）<2%，这些共有特征峰构成了六瓣红大蒜酶解产物HPLC标准指纹图谱。