[发明专利]一种广西美登木的组织培养快速繁殖方法

摘要

一种广西美登木的组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤(1)取广西美登木带腋芽的茎段作为外植体进行消毒；(2)将消毒后的外植体置于MS诱导培养基中诱导发芽得到无菌试管苗；(3)将无菌试管苗置于MS增殖培养基中进行试管苗快速繁殖培养获得丛生芽；(4)将丛生芽置于1/2MS生根培养基中培养得到完整的带根苗；(5)将完整的带根苗进行炼苗后移植于苗床生长一个月，再移栽至大田。采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高，可在短期内提供大量广西美登木的优质种苗，有效解决了广西美登木的规模化育苗问题。

主权项

一种广西美登木的组织培养快速繁殖方法，包括外植体的取材与消毒，无菌试管苗的获取，试管苗繁殖培养和试管苗炼苗移栽步骤，其特征在于，具体操作步骤和控制条件为：(1)外植体的取材与消毒：取带腋芽的茎段作为外植体，用质量百分数为0.05％洗洁精水溶液浸泡5min，再经流水冲洗15min；移置于超净工作台上，用添加了2‑3滴吐温‑20的质量百分数为0.1％升汞消毒8‑10min，然后用无菌水冲洗3‑5次，再用无菌吸水纸吸干表面水分，切成0.5‑0.8cm带一个腋芽的茎段，获得无菌外植体；所述无菌水为经高压灭菌后的蒸馏水，(2)无菌试管苗的获取：将步骤(1)得到的无菌外植体接种到诱导培养基中，在培养温度为24‑26℃，光照强度1500lux，光照时间为10‑12h·d‑1的条件下培养25d，诱导不定芽萌发，得到无菌试管苗；所述诱导培养基是以MS为基本培养基，添加入30g·L‑1蔗糖，3.5g·L‑1琼脂，1.0mg·L‑1的6‑苄基腺嘌呤6‑BA、0.5mg·L‑1激动素KT、0.2mg·L‑1的萘乙酸NAA，培养基pH值为5.8，在诱导培养基中添加6‑BA、KT和NAA，能够诱导不定芽萌发；(3)试管苗繁殖培养：将步骤(2)得到的无菌试管苗置于增殖培养基中，在培养温度为24‑26℃，光照强度1500lux，光照时间为10‑12h·d‑1的条件下培养30d，得到大量不定芽；所述增殖培养基是以MS为基本培养基，添加入30g·L‑1蔗糖，3.5g·L‑1琼脂，1g·L‑1活性炭，1.0‑2.0mg·L‑1的6‑苄基腺嘌呤6‑BA、0.1‑1.5mg·L‑1的灵发素LFS、0.3‑0.5mg·L‑1的吲哚丁酸IBA，培养基pH值为5.8，在增殖培养基中添加6‑BA、LFS和IBA可促进不定芽的分化和生长；(4)试管苗生根培养：将步骤(3)得到的不定芽切成带顶芽或叶芽的茎段，置于生根培养基中，在培养温度为24‑26℃，光照强度1500lux，光照时间为10‑12h·d‑1的条件下培养30d，得到完整的带根苗；所述生根培养基是以1/2MS为基本培养基，添加入30g·L‑1蔗糖，3.5g·L‑1琼脂，1g·L‑1活性炭，0.1‑1.0mg·L‑1的灵发素LFS、0.1‑0.3mg·L‑1的吲哚丁酸IBA、1.0‑2.0mg·L‑1的萘乙酸NAA，培养基pH值为5.8；在1/2MS生根培养基中添加LFS、IBA和NAA可获得完整的带根苗，经炼苗后可直接移栽至基质中；(5)试管苗炼苗移栽：将步骤(4)获得的完整的带根苗，在室温为23‑25℃的室内打开瓶盖，在瓶中加入少量自来水淹没培养基，炼苗3‑5d，用镊子取出试管苗，洗净根部培养基，移栽到泥炭土：细河沙＝3:1的基质中生长40d，再移栽至大田，该繁殖方法得到的单芽增殖系数达6‑13倍，经过扩繁和生根培养，组培苗生根率高达95.79％，移栽基质后成活率为92.5％，有效地解决了广西美登木的规模化育苗问题。