[发明专利]一种小鼠小脑颗粒细胞分离及培养方法在审
| 申请号： | 201510560474.6 | 申请日： | 2015-09-07 |
| 公开（公告）号： | CN106497862A | 公开（公告）日： | 2017-03-15 |
| 发明（设计）人： | 张清;齐来俊;蒋敏;张亚洲 | 申请（专利权）人： | 江苏齐氏生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214400 江苏省江阴市东盛*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供一种小鼠小脑颗粒细胞分离及培养方法，包括步骤(a)断颈处死小鼠，酒精消毒后剥离小鼠小脑，置于预冷无菌含双抗的PBS缓冲液中，并于解剖显微镜下迅速仔细地剥离小脑上脑膜和血管；(b)用预热混合酶液于37℃培养箱中消化10‑15min；(c)联合使用差速沉降和差速贴壁法获得小脑颗粒细胞；(d)培养过程中，不同时间点加入适量阿糖胞苷抑制非神经元细胞的生长。本发明提供的小鼠小脑颗粒细胞分离及培养方法可获得产量高、存活率高且纯度高的小鼠小脑颗粒细胞。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 小鼠 小脑 颗粒 细胞 分离 培养 方法 | ||
【主权项】：
一种小鼠小脑颗粒细胞分离及培养方法，其特征在于，包括步骤：(a)断颈处死小鼠，酒精消毒后于剥离小鼠小脑，置于预冷无菌含双抗的PBS缓冲液中，并于解剖显微镜下迅速仔细地剥离小脑上脑膜和血管；(b)PBS清洗剥离后的小脑，解剖剪剪碎组织块后预热混合消化酶液消化；(c)用含DnaseI的培养液吹打细胞，差速沉降后取上清200目筛网过滤，离心弃上清，并用完全培养基重悬沉淀，差速贴壁以合适的细胞量接种于多聚‑L‑赖氨酸包被的培养皿中；(d)培养过程中，不同时间点加入适量阿糖胞苷；(e)接种第7d，于培养基中加入5mM的D‑葡萄糖，以后每4d加一次。
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