[发明专利]一种大鼠角膜内皮细胞的分离、纯化及培养方法有效
| 申请号： | 201510560497.7 | 申请日： | 2015-09-07 |
| 公开（公告）号： | CN106497863B | 公开（公告）日： | 2019-10-11 |
| 发明（设计）人： | 田瑞;齐来俊;蒋敏;张亚洲 | 申请（专利权）人： | 江苏齐氏生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214400 江苏省江阴市东盛*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供一种大鼠角膜内皮细胞的分离、纯化及培养的方法，属于细胞生物学领域；其包括以下步骤：(a)角膜组织样本分离，获得单个细胞；(b)制备特异性吸附角膜内皮细胞的免疫磁珠，从分离的单个细胞中纯化角膜内皮细胞；(c)优化的细胞培养液，培养大鼠角膜内皮细胞。本发明提供的大鼠角膜内皮细胞的分离方法，操作简单、细胞产量及成活率高；本发明提供的大鼠角膜内皮细胞纯化方法，操作简单、得率以及纯化率非常高；本发明提供的大鼠角膜内皮细胞培养方法，细胞增殖块、周期短以及经济效益高。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 大鼠 角膜 内皮 细胞 分离 纯化 培养 方法 | ||
【主权项】：
1.一种大鼠角膜内皮细胞的纯化及培养的方法，其特征在于，它包括以下步骤：a、角膜单个细胞的制备：用消毒刀片剪碎角膜，最后用消化酶处理角膜组织，得到单个细胞；所述的消化酶处理角膜组织，具体方法为：用37℃预热的0.25％(m/v)的dispase酶消化30‑40min，然后加入0.05‑0.1％(m/v)的胰酶和0.1％(m/v)的胶原酶I消化5‑10min，加完全培养基终止消化，反复吹打消化液，100目筛孔过滤，收集滤液；滤液通过1500rpm离心5min，弃去上清，然后加入DMEM/F12完全培养基，重新悬浮细胞沉淀，收集角膜消化后单个细胞的细胞液；b、角膜内皮细胞的纯化：制备特异性吸附角膜内皮细胞的免疫磁珠，特异性免疫磁珠对步骤a中单个细胞的细胞液进行纯化；c、细胞培养基优化：制备大鼠角膜内皮细胞裂解液，添加碱性成纤维细胞生长因子，配制大鼠角膜内皮细胞的完全培养基；所述大鼠角膜内皮细胞完全培养基每升含有如下成分：10‑100mg细胞裂解液、1‑7.5mg碱性成纤维细胞生长因子、100mg胎牛血清、其余为DMEM/F12基础培养基。
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