[发明专利]一种大丽花脱毒种苗的高效扩繁方法

摘要

本发明公开了一种大丽花脱毒种苗的高效扩繁方法，包括以下步骤1）大丽花脱毒苗前处理；2）不定芽的诱导；3）切割不定芽继代增殖；4）炼苗；5）水培生根处理；6）水培壮苗；7）移栽。本发明的高效扩繁方法解决了大丽花脱毒苗扩繁过程中效率低下、易再次污染的问题，不仅能在短时间内扩繁出大量优良大丽花脱毒种苗，而且还避免了大丽花分株繁殖和种子繁殖所带来的品种退化问题，而且操作简单、易于工厂化推广，具有较高的生产实用价值。

主权项

一种大丽花脱毒种苗的高效扩繁方法，其特征在于：该方法步骤如下：1）大丽花脱毒苗前处理：将大丽花脱毒苗清洗干净并表面消毒，在无菌条件下切取叶柄和花托，移入装有配制好的不定芽诱导培养基广口瓶中；2）不定芽的诱导：将接种有脱毒苗外植体的不定芽诱导培养基广口瓶置于消毒处理过的培养室中光培养，诱导出不定芽；3）切割不定芽继代增殖：在无菌条件下将不定芽切下，移入装有增殖培养基的广口瓶中培养，得到大量大丽花幼苗；4）炼苗：逐步采用增强培养光照、降低培养温度的方法进行炼苗；5）水培生根处理：将炼苗后的脱毒试管苗从广口瓶中取出，保留原有根系，再将组培苗栽于水培盘中的栽培板上，水培盘中加入生根营养液；6）水培壮苗：生根培养7天后，倒掉生根营养液，加入壮苗营养液；7）移栽：将脱毒苗移栽到消过毒的基质上，置于室外自然光下生长；该方法的详细步骤如下：1）大丽花脱毒苗前处理：将大丽花脱毒苗先用自来水反复冲洗，用毛刷蘸取洗洁精洗一遍后接着用超纯水冲洗干净，用70%酒精浸泡15s，再用无菌水冲洗两次，0.1%升汞内加数滴吐温20溶液浸泡5min，用无菌水冲洗4‑5次，滤纸吸干，将大丽花脱毒苗的叶柄和花托移入装有不定芽诱导培养基的广口瓶中；2）不定芽的诱导：为防大丽花脱毒苗在生产过程中被病毒再浸染，培养室先经过消毒，消毒剂选用40%甲醛10ml/m3、高锰酸钾5g/m3，对整个培养室进行熏蒸2小时，熏蒸后，再采用75%乙醇擦拭培养架进行表面消毒，然后将接种有大丽花脱毒苗外植体的不定芽诱导培养基广口瓶置于消毒处理过的培养室中光培养，培养室温度控制为26±1℃，以荧光灯为光源，光照强度控制为1500‑2000Lx，光周期控制为光14h/暗10h，25‑30天诱导出不定芽；3）切割不定芽继代增殖：在无菌条件下将诱导2‑3cm的不定芽从外植体上完整的切下，转接到装有增殖培养基的广口瓶中，培养室温度控制为24±1℃、光照强度控制为1500‑2000Lx、光周期控制为光12h/暗12h下培养，培养15‑25天后可得到大量大丽花幼苗；4）炼苗：筛选5‑8cm的大丽花脱毒试管苗，转移到光照强度为2500‑3500lx的条件下，3‑5天后，将培养温度降低为20‑22℃，再过3‑5天，打开广口瓶封口，继续炼苗3‑5天；5）水培生根处理：为减少转接对脱毒试管苗根系带来的伤害，转接前向广口瓶内加入少量水，并用镊子轻轻搅动培养基，以免把苗子倒出时损伤根，试管苗倒出后洗净根上的培养基，移栽到装有生根培养液的水培盘中的栽培板上，栽培密度1000‑1200苗/m2，株距2‑3cm，行距2‑3cm，水培器皿用盆底长×宽=44×32cm，盆高=15cm的塑料盆作为栽培盆，每盆放2L营养液，并有定植孔间距为2cm‑3cm的栽培板漂浮在营养液上，将脱毒苗上方搭上一层透明的塑料薄膜，使其处于温度22‑25℃、湿度≥90%、光照强度为2000‑3000lx的清洁的温室内环境生长；6）水培壮苗：生根培养7天后，脱毒苗根系基本发育完全，此时，撤掉塑料薄膜，倒掉生根营养液，给幼苗浇施壮苗营养液；7）移栽：当大丽花脱毒苗长到12‑15cm时，移栽到消过毒的基质上，移栽密度为行距15cm、株距10cm，塑料薄膜覆盖保湿，10‑15天后逐步除去薄膜，置于室外自然光下生长；上述步骤1）和2）中的不定芽诱导培养基配方为：MS +2.5mg/L6‑BA+0.08NAA+3%蔗糖+6.5g/L植物凝胶，pH为5.8；上述步骤3）中的增殖培养基配方为：MS+3.0mg/L6‑BA+0.5mg/LNAA+0.5mg/LGA+2.5mg/L氯化胆碱+4%蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8；上述步骤5）和6）中的生根培养液配方为：500mg/L KNO3，500mg/L NH4NO3，92.5mg/L MgSO4·7H2O，173mg/L Ca (NO3)2·4H2O，150mg/L KH2PO4，32mg/L KCl，17mg/L MnSO4·7H2O，19mg/L Na2‑EDTA，14mg/L FeSO4·7H2O，2.2mg/L MnSO4·4H2O，0.8mg/L ZnSO4·7H2O，0.8mg/L H3BO3，0.4mg/L KI，50mg/L肌醇，1mg/L甘氨酸，0.05mg/LVB1，0.05mg/LVB6，混合制成生根营养液；步骤5）和6）中的生根培养液的另一种可选配方为：950mg/L KNO3，825mg/L NH4NO3，85mg/L KH2PO4，220mg/LCaCl2·2H2O，185mg/L MgSO4·7H2O，19mg/L Na2‑EDTA，14mg/L FeSO4·7H2O，11mg/L MnSO4·4H2O，0.4mg/L KI，3.1mg/L H3BO3，4.3mg/L ZnSO4·7H2O，0.125mg/L Na2MoO4，0.0125mg/L CuSO4，0.0125mg/L CoCl2·6H2O，50mg/L肌醇，1mg/L甘氨酸，0.05mg/LVB1，0.05mg/LVB6，混合制成生根营养液；上述步骤6）中的壮苗营养液配方为：850mg/L KNO3，750mg/L NH4NO3，165mg/L MgSO4·7H2O，75mg/L KH2PO4，200mg/L CaCl2·2H2O，20mg/L Na2‑EDTA，15mg/L FeSO4·7H2O，10.5mg/L MnSO4·4H2O，4.25mg/L ZnSO4·7H2O，3.0mg/L H3BO3，0.4mg/L KI，0.12mg/L Na2MOO4·2H20，0.012mg/L CoC12·6H2O，0.012mg/L CuSO4·5H2O，0.4mg/L KI，30mg/L肌醇，0.5mg/L甘氨酸，0.05mg/LVB1，0.05mg/LVB6，混合制成壮苗营养液。