[发明专利]甜瓜叶片蔗糖磷酸合成酶的提取及活性测定方法在审
| 申请号： | 201510570664.6 | 申请日： | 2015-09-09 |
| 公开（公告）号： | CN105087514A | 公开（公告）日： | 2015-11-25 |
| 发明（设计）人： | 田红梅;方凌;严从生;王朋成;王艳;张其安 | 申请（专利权）人： | 安徽省农业科学院园艺研究所 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12Q1/48 |
| 代理公司： | 安徽省蚌埠博源专利商标事务所 34113 | 代理人： | 杨晋弘 |
| 地址： | 230000 *** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种甜瓜叶片蔗糖磷酸合成酶的提取及活性测定方法，包括以下步骤：(1)酶液提取：取新鲜的甜瓜叶片迅速置于研钵中,用冰浴过的提取缓冲液研磨，充分匀浆后高速冷冻离心，取上清液用离心式去盐柱脱盐,提取的酶液可直接用于酶活性测定；(2)酶活性测定：取上述酶液加入反应底物，给予不同的反应温度及反应时间，确定甜瓜叶片蔗糖磷酸合成酶最佳反应温度及反应时间，从而能更精确的反映酶的活性。本发明能够有效将初提取酶液中的盐分、糖分、离子等小分子物质除去，并优化了酶的反应条件，从而能够更精确地测定叶片中蔗糖磷酸合成酶的活性。 | ||
| 搜索关键词： | 甜瓜 叶片 蔗糖 磷酸 合成 提取 活性 测定 方法 | ||
【主权项】：
甜瓜叶片蔗糖磷酸合成酶的提取及活性测定方法，包括以下步骤：(1)酶液提取：称取2g甜瓜新鲜叶片，放入预冷的研钵中，加10mL提取缓冲液；冰浴下研磨，充分匀浆后，0～4℃条件下12000rpm离心20min，取上清液，去除初提酶液中的盐分，纯化后的酶液可直接用于酶活性测定；(2)酶活性测定：以0.2mL酶液沸水浴10min为对照；取0.2mL酶液加入反应底物，15～40℃条件下反应3～30min；沸水浴1min，用双蒸水定容至1mL；加入0.1mL 2mol·L‑1NaOH，沸水浴10min，流水冲洗冷却；向反应液中加入3.5mL 30％HCl，1mL 0.1％间苯二酚，摇匀后在80℃水浴锅中水浴10min，流水冷却后，480nm比色。
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