[发明专利]一种快速大量提取分离薏苡仁低聚糖单体的方法

摘要

本发明公开了一种快速大量提取分离薏苡仁低聚糖单体的方法，属于植物活性成分的提取分离技术领域，其是以新鲜薏苡仁为原料，经选料烘干、粉碎过筛、加水复配、水洗淀粉、超声波‑微波协同提取、真空抽滤、醇析、离心浓缩、冷冻干燥、MPLC分离、MPLC二次分离的步骤，制得具有不同聚合度的薏苡仁低聚糖单体粉末。本发明以UMAE提取、MPLC分离为基础，利用微波、超声波协同提取具有振动匀化的优点，及MPLC制备量大，操作时间较短，分离柱填料能够自主填充、可增加分离选择性的特点，使低聚糖的提取时间、提取效率及分离效率都得到极大提高，且该工艺过程稳定、操作简便，可用于大量分离高纯度的薏苡仁低聚糖单体。

主权项

一种快速大量提取分离薏苡仁低聚糖单体的方法，其特征在于：以新鲜薏苡仁为原料，经选料烘干、粉碎过筛、加水复配、水洗淀粉、超声波‑微波协同提取、真空抽滤、醇析、离心浓缩、冷冻干燥、MPLC分离、MPLC二次分离的步骤，制得具有不同聚合度的薏苡仁低聚糖单体粉末；其各步骤具体操作如下：1）选料烘干：选取颗粒饱满、无病虫害的新鲜薏苡仁，筛选去芯后于50℃下烘至水分含量为8~10%；2）粉碎过筛：将干燥后的薏苡仁粉碎，过40目筛；3）加水复配：取步骤2）所得薏苡仁粉末，按料液比1:3加入去离子水混匀进行复配；4）水洗淀粉：将步骤3）所得复配料液过100目筛，再用薏苡仁粉末重量2~4倍的去离子水冲洗滤渣，然后合并滤液，于4℃条件下静置沉淀8 h，离心去除淀粉沉淀，所得上清液与冲洗后的薏苡仁滤渣合并；5）超声波‑微波协同提取：在步骤4）所得上清液与滤渣中加入无水乙醇，至溶液中乙醇的体积含量为30~40%，然后进行超声波‑微波协同提取；6）真空抽滤：提取结束后将提取液真空抽滤，弃去滤渣；7）醇析：将步骤6）所得滤液于60~65℃下浓缩至原体积的1/5~1/4后，加入浓缩液3倍体积、质量浓度为95%的乙醇，混匀后于4℃下静置12 h；8）离心浓缩：将步骤7）所得溶液离心后去除沉淀，上清液于55~65℃下浓缩至原体积的1/3~2/5；9）冷冻干燥：将浓缩液冷冻干燥，得薏苡仁低聚糖粗糖粉末；10）MPLC分离：将步骤9）所得薏苡仁低聚糖粗糖粉末溶于去离子水中，配制成浓度为0.4~0.6 g/mL的溶液，然后将溶液经0.22 μm的微孔滤膜过滤后注入MPLC进行分离，根据保留时间针对性地收集各目标化合物，收集液分别于65℃下回收溶剂后，经冷冻干燥得含特定化合物的冻干粉末；11）MPLC二次分离：取步骤10）所得含特定化合物的冻干粉末，分别按步骤10）的操作和色谱条件进行二次进样，收集保留时间相同的各目标峰，经溶剂回收、冷冻干燥即得不同聚合度的薏苡仁低聚糖单体粉末；超声波‑微波协同提取的反应系统包括高精度接触式温度传感器、微波发生器和超声波发生器；其中，超声波发生器的探头直径为φ18 mm，探头插入溶液的深度为1.2 cm，超声波频率为25 KHz；微波频率为2450 MHz；所述超声波‑微波协同提取具体分三个阶段进行：第一阶段为超声波间歇提取，超声波功率为100~120 W，超声波总处理时间为2.5~3.2 min，其中，处理10~12 s后停止15~20 s，如此循环；第二、三阶段为微波‑超声波共同提取，其中，第二阶段的微波功率为50~100 W、超声功率为480~500 W，提取时间为220~250 s，第三阶段的微波功率为280~300 W、超声功率为1000~1100 W，并于67~70℃下控温辅助提取80~110 s；MPLC的分离系统包括中压特制玻璃柱、色谱泵、DAD紫外全波长扫描器和FLASH ELSD蒸发光散射检测器、自动馏分收集器和手动样品加载模块；所述中压特制玻璃柱为Claricep Flash HILIC亲水柱，其填料粒径为20‑35 μm，孔径100A，比表面320 m2/g，碳含量5.0%；所述FLASH ELSD蒸发光散射检测器的检测条件为：吹扫氮气压力为2.5~3.5 bar，漂移管温度85~95℃；MPLC分离中上样体积为1 mL，流动相为乙腈与水的二元混合体系，其流速为30~40 mL/min，柱温25℃；流动相比例变化的具体程序为：乙腈比例为98~100%保持15 min，随后将乙腈比例降至88~90%保持10 min，再降至72~75%保持10 min，然后降至57~60%保持20 min，再降至35~40%保持10 min，最后降至12~15%保持6 min，随后在12 min内将乙腈比例提高至100%，保持40~55min至分离完成。