[发明专利]一种sll0147基因在合成集胞藻类胡萝卜素中的应用有效
申请号: | 201510574817.4 | 申请日: | 2015-09-10 |
公开(公告)号: | CN105087604B | 公开(公告)日: | 2018-12-25 |
发明(设计)人: | 陈高;何庆芳;张燕;于金慧;郑玲;边斐;葛海涛;宣宁;王瑜;刘园园 | 申请(专利权)人: | 山东省农业科学院生物技术研究中心 |
主分类号: | C12N15/31 | 分类号: | C12N15/31;C12N15/74;C12N1/21;C12R1/01 |
代理公司: | 济南金迪知识产权代理有限公司 37219 | 代理人: | 朱家富 |
地址: | 250100 山东*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | 本发明涉及一种sll0147基因在合成集胞藻类胡萝卜素中的应用。所述应用中涉及的sll0147基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明首次公开了集胞藻PCC6803的sll0147基因在类胡萝卜素合成中的重要作用,通过申请人在集胞藻PCC6803中利用过表达方法增加sll0147基因的表达后,突变株中类胡萝卜素组分百分含量有明显变化,其中蓝藻叶黄素含量增加了47.4%,玉米黄素含量增加了93.8%,而海胆酮含量降低了60.9%,β‑胡萝卜素含量降低了15.9%。 | ||
搜索关键词: | 一种 sll0147 基因 合成 藻类 胡萝卜素 中的 应用 | ||
【主权项】:
1.一种sll0147基因在提高集胞藻类胡萝卜素中蓝藻叶黄素和玉米黄素含量中的应用,所述的sll0147基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示;步骤如下:(1)以psbA2 ORF前500bp片段为启动子片段,与sll0147基因进行基因融合,制得融合片段Promotor+sll0147;所述psbA2 ORF的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示;(2)制备同源重组上游臂slr1285U基因片段,核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示;(3)制备同源重组下游臂slr1285D基因片段,核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示;(4)通过对质粒pKK233‑2进行扩增,向大肠杆菌T1T2 终止子中引入PstI、BamHI酶切位点,经PstI、BamHI内切酶酶切后,与同样经PstI、BamHI内切酶酶切的质粒pBluescript SK连接,制得质粒pBluescript SK T1T2;(5)用KpnI内切酶酶切步骤(2)制得的同源重组上游臂slr1285U基因片段,与同样经KpnI内切酶酶切的步骤(4)制得的质粒pBluescript SK T1T2连接,制得质粒pBluescript SK T1T2‑slr1285U;(6)用SacI内切酶酶切步骤(3)制得的同源重组下游臂slr1285D基因片段,与同样经SacI内切酶酶切的步骤(5)制得的质粒pBluescript SK T1T2‑slr1285U连接,制得质粒pBluescript SK T1T2‑slr1285UD;(7)用BamHI内切酶酶切质粒pBluescript‑Gm,回收庆大霉素抗性Gm片段,与同样经BamHI内切酶酶切的步骤(6)制得的质粒pBluescript SK T1T2‑slr1285UD连接,制得质粒pBluescript SK T1T2‑Gm‑slr1285UD;(8)将步骤(1)制得的融合片段Promotor+sll0147经SalI、EcoRI内切酶酶切后,与同样经SalI、EcoRI内切酶酶切的步骤(7)制得的质粒pBluescript SK T1T2‑Gm‑slr1285UD连接,制得重组载体p5S1285UDsll0147;(9)将步骤(8)制得的重组载体p5S1285UDsll0147转化集胞藻PCC6803,经筛选,制得转基因集胞藻,然后经培养,提取,制得类胡萝卜素。
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