[发明专利]基于末端延伸酶电化学核酸适体传感器测癌胚抗原的方法

摘要

本发明公开了一种基于末端延伸酶的电化学核酸适体传感器检测癌胚抗原的方法。首先在金电极表面修饰一层3’端巯基标记癌胚抗原核酸适体捕获探针；然后加入癌胚抗原和癌胚抗原核酸适体信号探针，3’端巯基标记癌胚抗原核酸适体捕获探针和癌胚抗原核酸适体信号探针都能特异性识别癌胚抗原，从而在电极表面形成夹心结构；接着在末端脱氧核糖核酸转移酶的作用下，在癌胚抗原核酸适体信号探针的3’端延伸生物素标记的核酸长链；而亲和素标记的辣根过氧化物酶能够亲和结合到生物素标记的核酸长链上；检测辣根过氧化物酶催化电解液产生的电化学信号变化实现对癌胚抗原的高灵敏度、高特异性检测，可用于肿瘤的早期诊断、疗效判断、病情发展和预后估计等。

主权项

1.一种基于末端延伸酶的电化学核酸适体传感器检测癌胚抗原的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、电化学传感器的制备：(a)金电极的清洗：以NaBH₄ 溶液浸泡后打磨，然后超声清洗；(b)自清洁表面的制备：室温下在金电极表面自组装3’末端巯基标记癌胚抗原核酸适体捕获探针溶液，然后用HS‑(CH₂)₁₁‑EG₂‑OH(OEG)室温下浸泡封闭不小于4 小时，得到自清洁表面；(c)信号探针的引入：在自清洁表面滴加癌胚抗原溶液反应不少于1小时，然后滴加信号探针溶液反应不少于1小时，制得有3’末端裸露的电极表面；(d)末端延伸：步骤(c )制得的电极表面在末端脱氧核糖核酸转移酶的作用下延伸出一条生物素标记的核酸长链，再加入亲和素标记的辣根过氧化物酶反应不少于15分钟，通过生物素‑亲和素相互作用，在电极表面修饰辣根过氧化物酶，制得电化学传感器；步骤二、电化学信号检测：将制备完成的电化学传感器放在三电极体系中以循环伏安法和时间电流曲线法进行检测，得到电化学信号；步骤一(b)中，3’末端巯基标记癌胚抗原核酸适体 捕获探针的浓度为0.2‑5μmol/L，自组装时间不小于4小时；OEG的浓度为1mmol/L；步骤一(d)中，末端脱氧核糖核酸转移酶的浓度为1U，生物素标记的核苷酸为生物素标记的腺嘌呤脱氧核糖核苷酸，浓度为5.7μmol/L，延伸时间不小于1小时；癌胚抗原核酸适体信号探针序列为：5’‑CCCATAGGGAAGTGGGGGA‑3’。